冷雨 李清山 何克 李善武

    骨关节炎(osteoarthritis,OA)是临床常见的慢性退行性关节疾病,患者表现为关节软骨发生退行性病变、纤维化、断裂、缺损或者整个关节面的损伤[1,2]。现阶段,OA是全球范围内导致患者残疾的主要疾病原因之一,且OA的发病率正在逐年攀升,显著影响了患者的身体健康和生活质量[3]。目前临床治疗OA主要依靠止痛药或物理治疗,但这些药物的疗效有限,且无法根治[4]。因此,寻找治疗OA安全有效的治疗药物,对提高患者的生活质量具有重要意义。瑞香素(Daphnetin,DAP)作为一种中药,是香豆素的衍生物,药理学研究表明DAP具有抗炎、抗肿瘤、抗凝、抗氧化、神经保护等药理作用[5,6]。但关于DAP对OA患者关节软骨细胞的自噬和凋亡的影响还尚未有相关报道。自噬是细胞通过溶酶体途径降解和清除体内物质的重要生物学过程,其广泛存在于细胞的生长、增殖、分化、代谢等生理病理过程中,也与一些退行性疾病如OA等息息相关[7]。腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是自噬相关的信号通路之一,研究发现活化的AMPK可以激活AMPK/mTOR信号通路,从而激活细胞自噬[8]。本研究以大鼠关节软骨细胞为研究对象,探究DAP对白介素-1β(interleukin,IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 大鼠关节软骨细胞购自宁波明舟生物科技有限公司。

    1.2 主要试剂 DAP(纯度≥98%)购自上海源叶生物科技有限公司;IL-1β、AMPK抑制剂Compound C购自美国Sigma公司;DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司;胰蛋白酶购自上海钰博生物科技有限公司;CCK-8试剂盒购自江苏弘麒生物科技有限公司;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自美国BD公司;Transwell小室购自Corning公司;Trizol试剂、反转录试剂盒购自北京天根生化科技有限公司;BCA蛋白定量检测试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司;p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、Bcl-2、Bax、Beclin-1、LC3、GAPDH一抗和相应二抗购自美国Abcam公司 ......