解燕昭 杨梅柳 虞武 董立朋 赵景茹 陈彦霞

    缺血性脑卒中致残率高,幸存患者长期存在严重的身体和认知功能障碍[1]。当脑缺血后,脑组织氧化与抗氧化系统失衡,细胞内线粒体氧化磷酸化受抑制,ATP生成障碍,活性氧(reactive oxygen species,ROS)急剧增加,细胞结构造成严重损害,即产生氧化应激,加快细胞凋亡、坏死等。ROS诱导的氧化应激可致血脑屏障内皮细胞的紧密连接受损[2]、神经损伤加重、脑梗死体积扩大,而使用抗氧化剂治疗可减轻内皮细胞损伤及血脑屏障通透性、减少神经细胞坏死[3],从而改善神经功能损伤。中医有关中风的治疗多强调活血通络、醒神开窍等,已逐渐显示出重要地位[4-7]。绞股蓝是一种传统中药,绞股蓝总苷具有很好的抗氧化作用[8],但笔者发现其在缺血性脑卒中的保护机制尚不明确。本研究通过氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)条件下培养人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC),模拟缺血性脑卒中的病理过程,并应用绞股蓝总苷进行干预,旨在探讨其中的抗氧化机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 HBMEC购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司,绞股蓝总苷购自上海源叶生物科技有限公司,蛋白提取试剂盒购自美国Thermo;引物购自美国Promega公司。兔抗超氧化物歧化酶(SOD)单克隆抗体、兔抗编码还原型辅酶/醌氧化还原酶[NAD(P)H:quinone oxido reductase,NQO1]单克隆抗体购自Abcam公司;β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司;0.9%氯化钠溶液购自石家庄第四制药厂,DMEM 培养液购自美国Sigma公司,胎牛血清(FBS)购自Gibco公司;ROS试剂盒和DCFH-DA购自中国博奥森公司,荧光探针购自中国博奥森公司,CCK-8试剂盒购自碧云天生物技术有限公司,PCR试剂盒购自美国Thermo公司。

    1.2 细胞OGD模型的建立及分组 HBMEC复苏后,使用10%FBS的DMEM培养,待细胞长至对数期时,将细胞随机分为Control组、OGD组、OGD+GP组 ......