钱庆增 吴于婷 王云宇 黄仕艺 孟春燕 裴盛斐 王雪 曹向可 冯福民 王彬

    众所周知,尘肺是最为常见的职业病之一,其占比最大。诸多研究表明[1,2],在发病过程中,巨噬细胞发挥着重要作用,而巨噬细胞会受到多种转录因子的调控,且转录因子也会受相关mRNA因子的调控。E2F1作为转录因子,可直接参与细胞周期的调控[3,4]。并有报道显示[5],E2F1在细胞周期调控中,可促进G1期向S期的转变。越来越多的证据表明,miRNA能够结合转录因子,实现基因表达的调控作用,继而影响细胞的生物学功能,并在多种疾病中发挥着作用[6]。据报道,miR-205高表达,可改善肺纤维化[7]。而LncRNA NEAT1发挥了何种作用,笔者目前未见相关文献,因而开展此次研究,以探讨LncRNA NEAT1对miR-205-5p和E2F1的调控作用,报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 试剂 LncRNA探针(上海艾博思生物科技有限公司),MH-S细胞(上海信裕生物科技有限公司),PBS(北京沃凯生物科技有限公司),转染质粒[李记生物科技(上海)有限公司],RIP试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司],RIPA裂解液[赛默飞世尔科技(中国)有限公司],Fast SYBR Green PCR试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司],PrimeScript RT reagent 试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司],SinotechTM组织冻存保护液(上海鲸舟基因科技有限公司),水合氯醛(青岛宇龙海藻有限公司),异丙醇(广州市鸿洲实验器材科技有限公司),EP管(上海聚慕医疗器械有限公司),PBS(北京沃凯生物科技有限公司),生理盐水(昆明南疆制药有限公司),无酶枪头(美国生物技术公司),异氟烷(瑞沃德生命科技有限公司),注射器(上海聚慕医疗器械有限公司),脱脂奶粉[赫澎(上海)生物科技有限公司],苯甲基磺酰氟(江西江蓝纯生物试剂有限公司),Trizol [赛默飞世尔科技(中国)有限公司],氯仿(上海吉至生化科技有限公司),蛋白酶K[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]。

    1.2 仪器 细胞过滤器(美国生物技术公司),移液器(德国Eppendorf公司),磁力架(深圳市博尔熙科技发展有限公司),生物安全柜(美国热电生物技术公司),恒温混匀仪(杭州奥盛仪器有限公司),高压灭菌锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),水平旋转摇床(无锡杰瑞安仪器设备有限公司),程序降温盒(上海雷布斯生物科技有限公司),超低温冰箱[赛默飞世尔科技(中国)有限公司],荧光定量PCR(美国应用生物系统公司),制胶仪(美国Bio-rad公司),CO2培养箱(北京萌壮科技有限公司),杜氏均质器(北京萌壮科技有限公司),制冰机(日本三洋公司),超纯水机(密理博中国有限公司),蛋白电泳仪(美国Bio-rad公司),电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司) ......