陈仕 黎慧娟 许若思 张彩英 陈露

    肝细胞癌(HCC)是最常见的原发性肝癌,也是我国第二大最常见的恶性肿瘤[1,2]。肝癌细胞具有侵袭性与转移性,这是造成肝癌发病率和死亡率不断上升的主要原因[3],导致肝癌患者确诊后的5年生存率很低[4]。近年来,通过手术、靶向治疗和免疫治疗肝癌的诊断和治疗取得了一定的进展,但肝癌的发生机制尚不明确,且肝癌对多种治疗药物产生耐药性,所以寻找新的分子靶标对肝癌治疗具有重要的意义[5]。长链非编码RNA(lncRNAs)是一组>200个核苷酸的转录本,已被确定为许多生理和病理过程的关键决定因素,特别是在癌症的恶性进展中。lncRNA参与肝癌的发生发展并已经成为肝癌药物干预的新靶点。例如lncRNA NHG5在肝癌细胞中高表达,抑制lncRNA NHG5的表达抑制肝癌细胞的增殖[6]。而lncRNA CBR3-AS1属于lncRNA,有研究显示lncRNA CBR3-AS1在胆管癌中高表达,抑制lncRNA CBR3-AS1的表达可以抑制胆管癌细胞的增殖与侵袭[7]。研究显示,miR-409-3p在肝癌组织中的表达降低,miR-409-3p过表达能够减少肝癌细胞的转移和侵袭[8]。核不均一核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)在肝癌细胞中表达上调,下调hnRNPA2B1的表达,促进Hep G2细胞凋亡[9]。经生物学分析显示,miR-409-3p与lncRNA CBR3-AS1、hnRNPA2B1之间具有靶向结合位点。推测LncRNA CBR3-AS1可能通过调节miR-409-3p/hnRNPA2B1轴对肝癌细胞的发生发展产生影响。本研究探索LncRNA CBR3-AS1对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-409-3p/hnRNPA2B1轴的影响,为肝癌的靶向治疗提供理论参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人肝癌细胞(Hep G2)购于中国科学院细胞库。si-NC、si-CBR3-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-409-3p、miR-NC、miR-409-3p mimics、pcDNA、hnRNPA2B1的序列及LncRNA CBR3-AS1、miR-409-3p、hnRNPA2B1、U6、GADPH引物均由广州市锐博生物科技有限公司设计合成。SYBR Green PCR Master Mix(SR1120)、Trizol试剂盒(15596-018)、RIPA裂解液(R0010)购于北京Solarbio;双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT273)、Lipofectamine 3000(QN2876)购于百奥莱博科技有限公司 ......