尹江 唐平 张慧 杨森

    口腔鳞状细胞癌(OSCC)是一种常见的头颈部癌症[1,2]。OSCC是由口腔上皮潜在恶性疾病异常增生发展成的,近年来其发病率呈上升趋势[3]。OSCC患者虽然通过手术、化疗等方法得到一定的治疗,但是其复发率高,致使确诊后五年内的生存率很低[4,5]。了解OSCC的发病机制,寻找新的相关生物标志物,确定新的治疗靶点至关重要。环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类共价封闭环状RNA分子,由于不受RNA外切酶的影响,而比线性RNA更稳定[6]。越来越多的研究证实circRNAs与包括癌症在内的多种疾病的发生和发展密切相关。circRNAs已经成为OSCC药物干预的新靶点[7,8]。circPARD3为circRNA之一,研究显示,circPARD3通过海绵miR-5194,增加ENO1的表达,促进OSCC增殖与迁移[9]。但circPARD3在OSCC的作用机制有待进一步研究。有研究显示miR-326在OSCC发挥抑癌作用,上调miR-326的表达显著抑制OSCC增殖与迁移[10]。而CXCL3在OSCC中高表达,抑制CXCL3表达,可显著抑制癌细胞增长[11]。经生物学分析显示,miR-326与circPARD3、CXCL3有结合位点。推测circPARD3可能通过调节miR-326/CXCL3轴影响OSCC的发生发展。本研究探索circPARD3对OSCC细胞迁移、侵袭、上皮质转化及miR-326/CXCL3轴的影响及其机制,为OSCC的靶向治疗提供理论参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人正常口腔细胞(NHOK)和人口腔鳞状细胞癌(CAL-27)购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。si-NC、si-circPARD3、anti-NC、anti-miR-326的序列由广州市锐博生物科技有限公司设计合成,circPARD3、miR-326、CXCL3、U6、GADPH引物由上海吉玛基因股份有限公司设计合成。Trizol试剂盒(15596-018)、RIPA裂解液(R0010)、SYBR Green PCR Master Mix(SR1120)购于北京Solarbio公司。Transwell小室(3422)购于美国Corning Costar。双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT273)、Lipofectamine 3000(QN2876)购于百奥莱博科技有限公司。E-cadherin(AF0138)和N-cadherin(AF0243)、Vimentin(AF0318)购于上海碧云天公司;GAPDH单抗(5174)多抗购自美国Cell Signaling Technology公司 ......