冯永笑 张丑丑 董艳琴 赵晓亮

    急性髓系白血病(AML)是一种髓系干细胞前体(红细胞、血小板和除B和T细胞之外的白细胞)恶性肿瘤[1];病程进展十分迅速,发病率随着年龄的增长而增加,患者存活率较低且预后不佳[2,3]。目前,AML的临床治疗方法包括诱导分化治疗、联合化疗、造血干细胞移植和免疫治疗,最常见的还是药物和化疗,但由于化疗耐药性的产生导致患者预后较差,探索新的更安全而有效的治疗方式已亟不可待。MicroRNAs (miRNAs)是一类短链非编码RNAs,长度为18～25个核苷酸,通过靶向下游mRNAs影响细胞分化、增殖和存活[4]。越来越多的证据表明miRNAs参与了人类癌症的发展,失调的miRNAs已被确定在AML发病中发挥关键作用[5];且一些miRNAs已被证明与AML患者的预后相关,例如miR-12462[6]和miR-155[7]。在miRNAs中,miR-186位于染色体1p31.1,在锌指蛋白265基因的第8个内含子处,已在多种癌症中得到广泛研究,在癌症中的作用取决于其对多种肿瘤生物学行为的影响,包括细胞增殖、迁移及细胞周期等。糖酵解是能量供应的主要方式,是肿瘤细胞的特征表型之一,miR-186可以抑制胃癌细胞的糖酵解[8]。研究报道称miR-186在皮肤鳞状细胞癌[9]中表达上调,而在骨肉瘤[10]、肺癌[11]及口腔鳞状细胞癌[12]中表达下调。另有研究表明,miR-186在AML患者中低表达,并且与患者的低生存率相关[13],上皮间质转化(EMT)能有效促进肿瘤细胞的生长、增殖和迁移,且EMT相关因子E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和AML患者的不良预后相关[14-16]。观察过表达miR-186对AML细胞增殖、迁移、糖酵解及EMT的影响,探讨miR-186在白血病细胞中的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株：人白血病细胞HL-60,购自河南省工业微生物菌种工程技术研究中心。

    1.1.2 药品与试剂：miR-186 mimic、阴性对照片段(mimic NC)由北京华大基因设计合成,Lipofectamine2000阳离子脂质体(美国Invitrogen公司),胎牛血清(FBS)、RPMI-1640培养基(美国Gibco公司),活细胞计数(CCK-8)试剂盒(南京诺唯赞生物技术股份有限公司),逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq II试剂盒(杭州主诺生物技术有限公司),萄糖检测试剂盒、乳酸检测试剂盒(美国BioVision公司),RIPA裂解液(美国ABW公司),BCA蛋白试剂盒(英国Abcam公司),鼠抗人(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和β-actin)、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG(二抗)(美国CST公司) ......