张玉杰 李佳慧 司宇光

    鼻咽癌是一种发生于鼻咽黏膜的上皮性癌,发病率高,常见于鼻咽部咽隐窝,早期表现为鼻出血、回缩性血涕等,由于其恶性程度高、淋巴转移早、发生位置隐匿,极易侵犯淋巴、颅内、骨、肝、肺组织[1]。鼻咽癌的治疗手段包括放疗、化疗、中医药、外科手术和免疫治疗等,但治疗总周期比较长,且预后不佳[2]。此外,肿瘤免疫逃逸是癌细胞在体内生存和增殖的关键,也是治疗肿瘤的重要突破口[3]。因此,探索减少肿瘤细胞免疫逃逸的靶向制剂是临床上改善患者预后的有效途径。杨梅素是杨梅科植物杨梅树叶、皮、根的提取物,能够抑制肝癌、胃癌、乳腺癌等多种癌细胞增殖[4],并且能够靶向抑制Janus激酶(JAK)-信号转导与转录激活子(STAT)-干扰素调节因子1(IRF1)轴,降低肺癌细胞的活性,减少免疫逃逸[5]。本研究拟通过体内外实验,观察杨梅素对鼻咽癌细胞免疫逃逸的影响以及对JAK-STAT-IRF1信号通路的调节作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞与动物：人鼻咽癌CNE1细胞,购自上海通派生物科技有限公司;40只健康雄性BALB/c裸鼠(体重18～22 g),购自北京百奥赛图基因生物技术有限公司,生产许可证号：SCXK(京)-2020-0007。

    1.1.2 药物、试剂与仪器：①杨梅素(纯度≥98%)、Broussonin E、紫杉醇(纯度≥98%),购自美国MCE公司;Hoechst染色试剂盒,购自美国ThermoFisher公司;RPMI 1640细胞培养基、4%多聚甲醛(PFA)、BCA蛋白浓度测定试剂盒、磷酸缓冲盐溶液(PBS)、RIPA裂解液、ECL超敏化学发光液、TritonX-100、羊抗兔二抗、羊抗鼠二抗和结晶紫溶液购自碧云天生物;MTT细胞生长测定试剂盒,购自美国Merck;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒,购自翌圣生物;一抗叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、磷酸化(p)- JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-STAT1、STAT1、IRF1、程序性死亡受体1配体(PD-L1)和GAPDH,购自美国Abcam公司。②CO2培养箱,购自德国Memmert公司;细胞板、移液枪、超净工作台、酶标仪、流式细胞仪,购自美国Thermo Fisher公司;荧光显微镜,购自日本Keyence公司;电泳仪和转膜仪,购自北京鸿涛基业科技;Tanon 1600全自动凝胶成像分析仪,购自天能集团。 ......