朱艳 江芳芳 熊累累 盛霞 秦淑兰 宗明

    糖尿病是临床常见基础疾病,好发于老年群体[1]。流行病学研究显示,我国老龄化进程加快,60岁以上人口总数已超过2.2亿,其中合并糖尿病总数超过1亿人[2]。持续的高糖环境可诱发多种并发症,其中糖尿病足是糖尿病常见且严重的并发症[3]。糖尿病足合并的慢性难愈创面可对患者日常生活质量产生严重负面影响,严重者可危及生命[4]。血管生成受损、慢性炎症、缝隙连接异常和受损的角质细胞迁移和增殖是导致糖尿病病足创面难愈的主要原因,其中角质细胞的功能紊乱是导致糖尿病创面愈合不良的核心靶点[5]。前期实验发现,miR-96-5p的差异化表达与糖尿病足病情发展密切相关,然而miR-96-5p的具体作用机制仍未完全明确。基于此背景,本次研究以期采用人角质形成细胞构建体外模型并采用高糖培养基处理以模拟糖尿病病理环境,旨在深入阐明miR-96-5p的差异化表达对人角质形成细胞增殖、侵袭、迁移等机制的影响,为后续临床靶向治疗提供思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 人角质形成细胞(human keratinocytes, hKCs)的分离、培养及高糖处理：①人角质形成细胞分离、培养 取正常人群经环状切除术后的包皮皮肤,将组织置入75%的乙醇中消毒,角度完成后采用PBS进行冲洗,随后将结缔组织、血管和皮下脂肪组织剔除,将处理后的组织处理成1 cm×1 cm块并置入3.3 mg/ml dispase Ⅱ中进行消化,消化维持14 h,环境温度保持于4℃。次日取消化完成组织将真皮层和表皮层分娩,并将表皮置入离心管中进行离心,离心完成后再次消化15 min。随后再次进行离心(5 min,1 500 r/min),并在离心完成后进行震荡,并过滤吸取细胞悬液,移液至0.1% Ⅰ型牛胶原的培养皿中,将培养皿中细胞调整至3×106个。标准环境下再次进行培养,环境为5% CO2,37℃。次日待细胞生长融合至80%时终止消化并离心采集细胞,并继续进行传代操作 ......