杨洪乐 杨丽妙 杜欢欢 张曼娜 胡蕊 郝丽颖

    白细胞和血小板是血液中的重要成分,其数量和功能是临床密切关注的内容,在血液凝血、溶血和免疫系统中发挥了很重要的作用,因此其数量准确与否对于临床用药、诊断、监控、疗效等非常关键。血细胞分析常见方法包括电阻抗法,射频电导法,激光散射法,流式细胞术法[1,2]等。但是由于诸多因素的影响,如有核红细胞造成白细胞计数假性增高[3]、原始和幼稚细胞增多、黄疸、冷凝集、溶血、仪器异常提示、人体细胞的多样性和复杂性以及血细胞分析仪工作原理的局限性[4-6],会出现血常规检测结果与临床症状不相符的情况[7],这时复检就显得尤为重要。其中血涂片复检中的的细胞计数是通过正确合理使用显微镜观察外周血涂片内定量区域定量细胞的形态和计数,得到更为准确的细胞计数结果[8]。但在使用显微镜进行复检时,人工计数的质量和数量会受到各方面因素的干扰,除人员操作等因素外[9],显微镜的不同视场数也是差异因素之一。因此,本研究探讨不同视场数显微镜计数白细胞和血小板与经典方法间的差异。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 收集2021年11月至2022年5月河北医科大学第二医院门诊就诊患者进行血常规检测完毕后的标本,选取白细胞和血小板低值(白细胞9.5×109/L、血小板>350×109/L)的标本各100例(非血液病,仪器无异常报警)。

    1.2 仪器与试剂 Beckman Coulter Unicel DxH 800全自动血细胞分析仪及其相关原装配套试剂、质控品、校准品等;视场数为18的Olympus CX21显微镜,视场数为26.5的Olympus BX70显微镜;改良牛鲍计数板、白细胞稀释液(2%乙酸溶液)、血小板稀释液(10 g/L草酸铵溶液),瑞氏-姬姆萨染色液。

    1.3 方法

    1.3.1 血涂片制备：使用清洁、干燥一次性载玻片,距离玻片磨砂面端1 cm处,加1滴(约5～10 μl)充分混合均匀的外周静脉抗凝血液标本,握住另一张边缘光滑的推片,保持推片与载玻片呈30°～45°角,使血滴与推片快速散开,匀速、平稳的推动推片至载玻片的另一端。制好的血涂片在空气中晃动干燥,血膜由厚到薄逐渐过渡,呈“子弹头”状,头、体、尾分明[11]。

    1.3.2 血涂片染色：制好的干燥血涂片水平放到染色架上,加瑞氏-姬姆萨染色液覆盖整个玻片,产生轻微的表面张力,染色3～5 min后加入适量缓冲液,用吸耳球把染液和缓冲液吹均匀,再染色15～20 min。染色结束后,用流水缓慢冲洗玻片,直至不再有带颜色的水滴,把血涂片背面染料残渣擦拭干净,晾干备用[11] ......