许汉兵 韩建涛 张成鹏

    结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化道恶性肿瘤之一,位居我国恶性肿瘤病死率第三位,且发病率、病死率仍呈逐年上升趋势,严重危及国民的生命安全[1]。CRC早期诊断率低、术后复发转移率高、化疗耐药导致其预后很差[2],因此了解其癌细胞的增殖、迁移和侵袭对CRC患者至关重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一种长度>200个核苷酸的非编码RNA,在多种疾病中异常表达[3],TMPO反义RNA1(TMPO antisense RNA1,TMPO-AS1)是一种lncRNA,有报道表明其在多种癌症中高表达,促进癌细胞发展[4],如在肺癌细胞中,沉默TMPO-AS1上调miR-143-3p表达从而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并诱导癌细胞凋亡[5],但TMPO-AS1在CRC发展中的作用尚未阐明。miRNAs是在真核生物中发现的一类内源性的非蛋白质编码的RNA分子,能够与特定的mRNA结合,并在转录后负调控基因的表达,其大小为18～25个核苷酸[6]。有研究表明,miR-340-5p在多种癌症中低表达,上调后可抑制癌细胞的侵袭,转移等[7],利用软件分析发现TMPO-AS1与miR-340-5p有互补结合位点。miRNAs能够与特定的mRNA结合,并在转录后负调控基因的表达,RUNT相关转录因子1(Runt-associated transcription factor 1,RUNX1)是RUNX转录因子家族的成员,该家族进化高度保守[8],有研究表明RUNX1在CRC组织中高表达,促进CRC转移[9],利用软件分析发现miR-340-5p与RUNX1存在互补结合位点。综上所述,对其机制做出以下推测:LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴影响CRC细胞增殖、迁移和侵袭。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29均购自普诺赛生物科技有限公司。

    1.2 主要试剂 Firefly &Renilla Dual Luciferase Assay Kit购自苏州宇恒生物;Lipo3000转染试剂购自默克;CCK-8试剂盒购自上海经科化学公司;EDU细胞增殖检测试剂盒购自锐博生物;RUNX1、PCNA、MMP-2抗体购自CST公司。

    1.3 细胞培养 将HCoEpiC、SW480、HCT116、LOVO、HT-29细胞置于含有10%胎牛血清的培养基中,在37℃、5% CO2的环境中培养 ......