蒋晨 万新娟 王绍飞 王晓虹 丁琳

    糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见的严重微血管并发症,已成为工作年龄段(18～65岁)人群的主要失明原因之一[1]。流行病学研究显示,到2045年将有7亿成年人患有糖尿病,其中35%的患者将并发DR[2]。研究发现,糖尿病可通过抑制视网膜细胞自噬功能增加毛细血管和细胞的炎症、晚期糖基化终末产物积累和氧化应激,促进细胞凋亡并造成视网膜损伤[3]。因此,抑制视网膜细胞自噬可能是治疗DR的重要策略。根据中医理论,“湿”和“热”是糖尿病的主要病机[4]。阿江榄仁酸(arjunolic acid,AA)作为主要在青钱柳中发现的齐墩果酸类三萜化合物,在中国古代药典《中华本草》具有“清热解毒、生津止渴”的功效,发挥抗糖尿病、抗炎、抗氧化和抗凋亡活性的作用[5-6],提示AA可能是治疗DR的一种有前景的候选药物。本研究通过构建DR大鼠和细胞模型,评估AA对DR的疗效和潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂:阿江榄仁酸(批号:CAS:465-00-9,上海源叶生物科技有限公司);链脲佐菌素(STZ,货号:18883-66-4,美国Sigma公司);HE染色试剂盒(货号:C0105S,北京碧云天);二氢乙锭(DHE)染色试剂盒(货号:104821-25-2,美国Sigma公司);BCA蛋白定量试剂盒(货号:CW0014S-500T,中国康为世纪公司);抗LC3、p62、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、GAPDH抗体(货号:4108、23214、5831、2535、2983、5536、92310,美国CST公司);辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(货号:75920,美国CST公司)。

    1.1.2 实验动物:60只健康SPF级雄性SD大鼠(体质量180～200 g)购自上海斯莱克实验动物公司,动物许可证号:SCXK(上海)2020-0005。实验动物均于新疆维吾尔自治区人民医院实验动物中心饲养,12 h光暗交替,室温(25±2)℃下自由标准进食水。

    1.2 方法

    1.2.1 动物模型构建及分组处理:所有大鼠随机分为对照组(Con)组、模型(STZ)组、阿江榄仁酸低剂量(AAL)组和阿江榄仁酸高剂量(AAH)组,每组15只 ......