陈永锋 宋和强 王鹏 郭建伟 陈晓超

    骨关节炎是关节部位的退行性炎症病变,常发于膝、胯、手和脊柱等部位关节,其主要病理特征为软骨组织的退变和炎性反应[1]。据统计,>65岁的老龄群体中高达1/2的人患有骨关节炎[2]。骨关节炎不仅带来生理上的疼痛,而且会导致行动困难,甚至残疾,严重影响患者的生活质量,给患者家庭造成严重的负担[3]。骨关节炎的发病由多种因素引起,但其发病的分子调控机制还没有得到完全的阐明[4]。软骨细胞是关节软骨的主要组成细胞,其通过调控细胞胞外基质和基质降解酶的合成和分泌,维持关节组织的稳态[5]。在炎性因子的刺激下,软骨细胞的新陈代谢过程被扰乱,导致细胞外基质过度降解和凋亡,是关节炎发病的重要病理变化[6]。因此,探寻骨关节软骨细胞炎症损伤过程中的关键调控基因,对于研发关节炎的有效治疗方法具有重要意义。长链非编码 RNA(long noncoding RNAs,lncRNA)是长度>200个核苷酸的非编码RNA,具有调控染色质重构、基因转录和蛋白翻译等多种功能,在细胞增殖、周期、凋亡和分化等细胞生物学过程中发挥重要作用[7]。研究表明LncRNA参与调控多种疾病的发生和进展过程,是当前研究的一个热点领域[8]。已有研究发现多种lncRNA在骨关节炎中异常表达,特别是对软骨细胞的炎症损伤具有重要的调控功能[9]。DNA 损伤激活的非编码 RNA(non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD)是目前研究比较广泛的一个新型lncRNA,在哺乳动物中高度保守,对基因组的稳定性具有重要的调控作用,已在多种疾病中报道了其重要功能[10-12]。值得注意的是NORAD在炎症相关的疾病中异常表达,对炎性反应和炎症引起的细胞损伤具有重要的调控作用[13-15]。本研究通过IL-1β刺激软骨细胞建立骨关节炎的细胞模型,研究NORAD对软骨细胞炎症损伤的调控功能,并探讨其可能的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人关节软骨细胞和软骨细胞完全培养基购自武汉普诺赛生命科技有限公司;重组人IL-1β蛋白购自北京索莱宝科技有限公司;总RNA提取试剂TransZol、蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒购和ECL发光试剂自北京全式金生物技术股份有限公司;逆转录试剂盒PrimeScript RT Reagent Kit和实时定量荧光PCR试剂盒TB Green Fast qPCR Mix购自大连宝生物工程有限公司;Calcein AM细胞活性检测试剂盒和一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天科技有限公司;人IL-6和TNF-α的 ELISA检测试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司;兔抗人Bax、Bcl-2、MMP-13、COL2A1和GAPDH一抗和HRP标记的山羊抗兔二抗购自武汉三鹰生物技术有限公司;兔抗人NF-κB p65和phospho-NF-κB p65一抗购自上海赛信通生物试剂有限公司;PCR扩增引物由上海生工生物工程股份有限公司合成;NORAD siRNA和对照NC siRNA由上海吉玛制药技术有限公司合成 ......