李晓敏 于哲 曹珊珊 槐梅 韩洪涌

    肺癌分为小细胞肺癌(small-cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC),其中非小细胞肺癌确诊病例约占肺癌比例的80%～95%[1],在如此高的比例下,死亡率也使占据总死亡数的首位,所以在中国NSCLC可以说是首屈一指的肿瘤杀手。所以目前最紧要的任务时积极探索NSCLC发生发展的分子机制,对于改善肺癌患者生存率至关重要。M2型肿瘤相关巨噬细胞在非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤进展中与肿瘤生长呈正相关趋势。在NSCLC中,NUSAP1敲低增加了B细胞易位基因2(BTG2)的表达,降低了磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)的表达水平,促进NSCLC细胞凋亡,抑制细胞增殖,细胞迁移和侵袭。肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是肿瘤微环境(TME)中含量最多的细胞对肿瘤生长中血管淋巴管的形成、降解血管基底膜以及细胞外基质、抑制肿瘤免疫等多方面作用,对肿瘤生长迁移发挥促进作用[2]。由于M2巨噬细胞的不同亚型表现出不同的功能,所以M2型巨噬细胞可以很灵活的适应不同肿瘤环境分泌炎性因子,促进肿瘤生长。肿瘤相关巨噬细胞可以通过分泌基质金属蛋白酶(MMPs)、纤溶酶、丝氨酸蛋白酶等降解血管基底膜和细胞外基质,促进肿瘤细胞的转移[3-5]。核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)是一种微管结合蛋白,它可以促进有丝分裂纺锤体微管的形成[6]。并且NUSAP1在许多恶性肿瘤中高表达,对有丝分裂早期和晚期起调节作用[7-9]。在此我们通过探究NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中表达对非小细胞肺癌的影响以及分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 人来源非小细胞肺癌样本均有华北石油管理局总医院提供;C57BL/6雄性小鼠购自购自北京福贝斯公司;Lewis 肺癌(lewis lung carcinoma , LLC), 源于 C57 BL/6 小鼠,属鼠源性的非小细胞肺癌细胞株,购于医学科学院。试剂:pH值 6.0枸橼酸缓冲液购自上海碧云天生物技术有限公司;BSA购自上海酶联生物科技有限公司;DMEM培养基购自美国Gibco公司;DMEM:F12(C11330500BT)培养基购自美国Gibco公司;慢病毒及shRNA等生物制品均有生工生物工程(上海)股份有限公司合成;全营养培养基购自西班牙PharmaMar公司;RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司;WB所用NUSAP1、p-PI3K、t-PI3K、MMP-9、GAPDH均购自美国Abcam公司 ......