张珂珂 黄国宝

    严重烧伤是一个复杂的病理生理过程,可导致多种器官功能障碍[1-3]。美国的一项流行病学调查表明,在全身面积>30%的严重烧伤患者中,急性肺损伤(ALI)是最常见的并发症,其发病率为26.7%～45%,死亡率为40%～60%[4-5]。ALI通常发生在烧伤后24～48 h内,主要表现为肺泡-毛细血管屏障受损、组织水肿、炎性细胞浸润和氧化应激损伤[6-7]。其中,炎症反应和氧化应激在ALI中扮演了重要的角色[8]。研究证明,miRNA作为炎性反应和氧化应激相关基因的关键调节因子,被认为是改善ALI的潜在治疗靶点[9]。例如,miR-135a-5p通过靶向TBK1进而调控ALI相关的炎性反应和氧化应激反应[10]。研究证明, miRNA-429降低与肺组织损伤密切相关,抑制miRNA-429表达能够明显降低炎性细胞因子的分泌,对肺损伤具有一定的保护作用[11]。另外,Fan等[12]证实,过表达miRNA-429能够提高氧化应激相关分子SOD和CAT含量。以上结果显示,miRNA-429在炎性反应、氧化应激等方面发挥重要作用。本研究旨在明确miR-429在烧伤模型小鼠中的表达情况,并进一步探讨miR-429对烧伤小鼠ALI的影响及分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 30只6～8周龄C57BL/6小鼠均购买于上海南方模式生物科技有限公司,许可证号为KYXK(沪)2023-0005,体重为200～250 g,购入后于SPF级动物饲养中心饲养,饲养湿度约55%～60%,温度23～25℃,12 h昼夜光照循环,正常进食和自由饮水。待C57BL/6小鼠适应性饲养1周后再进行实验。实验均遵循动物实验指导原则。该实验经过潍坊医学院附属医院动物伦理与福利委员会批准。

    1.2 主要试剂 MDA检测试剂盒、SOD检测试剂盒、CAT检测试剂盒、 GSH检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司;TNF-α ELISA试剂盒、IL-1β ELISA试剂盒、IL-6 ELISA试剂盒以及IL-8 ELISA试剂盒均购自武汉艾美捷科技有限公司;EASYspin Plus 快速RNA提取试剂盒购自杭州昊鑫生物公司;Hifair?Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司;苏木素伊红(HE)染色试剂盒、RIPI组织裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、TUNEL试剂盒均购自北京索莱宝生物技术有限公司;Nrf2抗体、HO-1抗体、GAPDH抗体以及HRP标记的二抗均购自美国Abcam公司;miR-429 antagomir及其阴性对照由广州锐博生物技术有限公司提供 ......