宋梦 许承彬 张来香 宋炜

    乳腺癌发生于乳腺上皮组织细胞,其发病率居女性恶性肿瘤发病率首位,严重危害女性生命健康[1]。目前,乳腺癌的治疗以手术切除为主,再根据病情以放疗、化疗等为辅助治疗,放疗费用高、不良反应大,现阶段,化学药物治疗仍为主要的临床治疗手段[2]。由于乳腺癌易复发、易转移,筛选高效、低毒的治疗药物对乳腺癌的治疗具有重要的临床意义。益母草碱是从益母草中提取的一种天然生物碱,具有多种药理活性,如抗氧化、神经保护、抗癌、抗炎等[3],已被用于抗癌药物的研究中。Lin等[4]研究表明,益母草可以显著促进人宫颈癌细胞的凋亡。Liu等[5]研究表明,益母草碱可以通过抑制的miR-18a-5p/SOCS5/JAK2/STAT3轴活性,破坏CML恶性肿瘤。且益母草碱在动物的毒性实验中尚未出现明显的不良反应[6],具有较高的临床应用价值。脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,Fas)与脂肪酸合成酶配体(fatty acid synthase ligand,FasL)信号通路(Fas/FasL),可以介导细胞外源性凋亡[7],是调控细胞凋亡的主要途径之一。本研究以4T1细胞株为研究对象,探究益母草碱对Fas/FasL信号通路的调节作用,以及对乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡等的影响,以期为乳腺癌的临床治疗提供理论支持。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 4T1乳腺癌细胞购自中国科学院(上海)细胞库;益母草碱(≥98%)购自上海西格生物科技有限公司;CCK-8试剂盒(CA1210)、凋亡试剂盒(CA1020),购自索莱宝生物科技有限公司;N-cadherin(AF0243)、Vimentin(AF1975)、Fas(AF6861),细胞周期试剂盒(C1052)购自碧云天生物科技有限公司;FasL(sc-19988)购自圣克鲁斯生物技术有限公司;LipofectamineTM 3000 试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞增殖活性的检测:取对数期生长的4T1乳腺癌细胞,制备单细胞悬液,以2×104个/孔接种于96孔板中,加入完全培养基,分别再加入终浓度为10、20、40、80、160 mmol/L的益母草碱,培养箱中培养12、24、48 h,加入10 μL的CCK-8,孵育4 h,使用酶标仪,测定每孔在450 nm处的OD值,计算细胞存活率 ......