付琨燕 刘慧斌 苏男 李斯琴

    帕金森病是一种黑质多巴胺随年龄增长而呈退行性变的疾病,故发病人群以>60岁为主,目前尚未有根治手段,研究该病的发生、发展作用机制,对其治疗具有重要意义[1-3]。长链非编码RNA(lncRNA)是可在转录后调节基因表达的非编码RNA分子,可作为帕金森治疗的潜在靶点,但lncRNA KCNQ1OT1可在转录后调节基因表达而参与肿瘤、糖尿病肾病及心肌病的发生、发展,但在帕金森中相关作用机制目前尚不明确[4]。miRs在神经细胞凋亡、氧化应激及炎性反应过程中均发挥重要作用,miR-132在帕金森病中呈高表达,可参与应激反应调节[5]。1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)是一种在帕金森病细胞实验模型建立中应用较为广泛的神经毒素,可造成多巴胺能神经元氧化应激、细胞凋亡[6]。笔者发现lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p在帕金森病模型细胞中的作用和关系尚不明确,基于此,本研究通过MMP+诱导建立帕金森病模型细胞,以下调lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达的方法明确其对帕金森病模型细胞损伤的影响。

    1 材料与方法

    1.1 研究材料 (1)研究细胞:人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞来自中国科学院细胞库,本研究经巴彦淖尔布医院伦理委员会审核批准。(2)主要试剂:RPMI-1640培养基(武汉益普生物科技有限公司),活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测试剂盒(北京索宝科技有限公司),lncRNA KCNQ1OT1抑制剂(anti-lncRNA KCNQ1OT1)、模拟物(lncRNA KCNQ1OT1)、miR-132-5p抑制剂(anti-miR-132-5p)、模拟物(miR-132-5p)、阴性对照(KCNQ1OT1-NC、miR-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1、pcDNA)、miR-132-5p的野生及突变型双荧光素酶载体均购自南通百奥迈科生物公司,流式细胞仪(美国BD公司),BCA蛋白定量试剂盒(上海碧云天生物技术公司),Bcl-2蛋白、Bax蛋白抗体(SCBT公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:将人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞放入RPMI-1640培养液(10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/ml酶联素)中,之后将其放入培养箱(温度37℃、5%CO2)中进行培养,每3天更换1次培养液,密度达80%～90%时,将培养基除去,进行传代培养,取3～5代细胞进行后续实验 ......