潘亮 畅雅学 段万里 邓骞

    肾癌是起源于肾小管上皮的恶性肿瘤性疾病,占成人恶性肿瘤的2%～3%,此病患者主要症状包括血尿、腰痛和腹部包块等,对患者日常生活造成一定影响[1-2]。miRNAs是近年来肿瘤研究的热点之一,是一种长度21～25个核苷酸的内源性非编码基因,在人类基因组中可以序列特殊性方式调节30%～60%蛋白质编码基因表达,在肿瘤的发生、发展中起着关键作用[3]。铁死亡的出现与疾病的发生、发展及严重程度具有紧密的联系,在多种疾病的进展中均会起到一定的调控作用。研究表明,铁死亡能够作为困扰全球健康的肾癌抑制靶点,为其治疗方式及患者预后的改善情况开辟新的研究方向[4]。索拉非尼是治疗肾癌的有效药物治疗,但因过度用于临床且服药周期较长,一些患者在使用过程中出现耐药,导致疗效不显著,如何很好的改善索拉非尼耐药是一个亟需解决的问题[5]。本文主要探究miR-572经铁死亡在肾癌细胞凋亡、索拉非尼耐药中的作用,对改善肾癌患者治疗效果及预后具有重要意义,报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞:人肾癌细胞系786-0购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

    1.1.2 主要试剂:miR-572过表达质粒、miR-572 siRNA由广州威佳科技有限公司合成;DMEM培养基购于上海中乔新舟生物科技有限公司(货号:ZQ-100);p53抗体、SAT1抗体购于上海科敏生物科技有限公司(货号:bsm-33058M、bs-17244R)。(3)主要仪器:光学显微镜购于北京亿诚恒达科技有限公司(货号:Contour Elite);荧光定量PCR仪购于武汉益普生物科技有限公司(货号:CG-05)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:将肾癌细胞放置于含有10%胎牛血清、1%双抗(100 U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素)、1%谷氨酰肽的DMEM培养基中并放置于含5% CO237℃细胞培养箱温箱中,根据其生长情况2～3 d传代或换液1次,当细胞密度长至80%～90%时,使用胰蛋白酶消化传代进行后续实验 ......