赵亚平 刘坤坤 高玮 高慧 谢淼

    人体严重烧伤或创伤常引发皮肤的大面积缺损,而创面修复后患者常因汗腺缺失、分泌管道被瘢痕组织阻塞而无法分泌汗液,引发体温调节障碍[1]。如何实现汗腺修复和皮肤重建是目前医学界关注的重点内容。表皮干细胞与汗腺均来源于外胚层,已有研究显示表皮干细胞能在特定环境及关键因子的诱导下转化为毛囊或皮脂腺,对改善创伤后皮肤重建和排汗功能具有重要意义[2]。叉头框C1(FOXC1)蛋白是转录因子FOX家族重要成员,其可参与调控毛囊干细胞和造血干细胞干性[3,4],但其在表皮干细胞中作用尚不明确。本次研究通过设计合成FOXC1模拟物,通过转染导入表皮干细胞,探究其对表皮干细胞向汗腺细胞分化的影响。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2021年1月至2022年6月于我院泌尿外科行包皮环切术7例患者的正常包皮组织,年龄18～41岁,本研究取得患者知情同意和医院伦理委员会批准。将包皮组织修剪成约1 cm×1 cm大小,加入0.25%胰酶+EDTA消化分离表皮和真皮层,Ⅳ型胶原黏附法分离表皮干细胞,然后在含人重组表皮生长因子(EGF)、K-SFM的培养基中进行培养,定期换液,观察细胞生长情况,待生长至90%融合时消化下来,取二代表皮干细胞进行后续实验,并根据细胞形态学特征及免疫组化检测细胞表型结果以鉴定表皮干细胞,免疫组化检测角蛋白(CK)19、CK18、癌胚抗原(CEA)、β1整合素(ITGB1),以CK19、ITGB1棕黄阳性表达,CK18、CEA阴性表达作为符合表皮干细胞。取处于生长对数期的表皮干细胞,按照Lipofectamine 2000转染试剂盒说明书将FOXC1 shRNA干扰质粒、pCMV-FOXC1过表达质粒转染至细胞中,并采用嘌呤霉素筛选稳定干扰FOXC1 表达和稳定过表达FOXC1 的细胞,分别作为过表达组和干扰组,另取一组细胞不做处理作为对照组, ......