镡云辉 赵蓉 刘志明 卓奥 刘唐兴

    肾癌是常见的泌尿系统癌症之一,肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是最常见的肾癌类型,约占所有原发病例的60%～80%,世界范围内每年有大量人死于该疾病,是威胁人类生命安全的全球性恶性疾病[1-3]。微小RNA(microRNA,miRNA)表达失调是ccRCC的重要致病因素,可通过干扰细胞周期来介导ccRCC的进展[4],miR-376c-3p是一种具有抑癌作用的微小RNA,在胃癌组织中显著表达不足并可作为其有效的生物标记物[5]。研究显示miR-376c-3p在乳腺癌组织、乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞系中均下调,能阻碍乳腺癌干细胞的自我更新、增殖和侵袭,降低乳腺癌细胞增殖及迁移能力并抑制其在异种移植瘤小鼠体内生长[6-7];miR-376c-3p的异位表达可通过降低细胞周期蛋白D1表达而导致神经母细胞瘤细胞周期阻滞及其细胞活力抑制[8],miR-376c-3p在口腔癌中下调并具有诊断和预测预后的潜力[9],因此推测miR-376c-3p可能成为ccRCC的诊疗靶点。本文通过体外培养人ccRCC细胞786-O并建立其裸鼠移植瘤模型,探究miRNA-376c-3对ccRCC的肿瘤细胞生长的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物及细胞株:①SPF级BALB/c裸鼠购于湖北贝恩特生物科技有限公司[SCXK(鄂)2021-0027],雌性,7～8周,体重18～21 g,适应饲养在湿度55%～60%、温度22～25℃的屏障环境动物房内,1周后用于后续实验,所有操作符合3R原则。②人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC均购于国家实验细胞资源共享平台。

    1.1.2 主要试剂与仪器:①miR-376c-3p inhibitor、miR-376c-3p mimics、miR-376c-3p阴性对照、miR-376c-3p与U6引物购于江苏赛索飞生物科技有限公司;TRI试剂、一步法实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-PCR)试剂盒购于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司;TUNEL检测试剂盒、兔抗人Bax及Ki67一抗、吉姆萨染液、小鼠抗人Bcl-2一抗、Alexa Fluor?680偶联驴抗兔二抗、Alexa Fluor?594偶联驴抗小鼠二抗购于美国Abcam公司等。②ABI7500实时荧光定量PCR仪购于美国Applied Biosystems公司;CFM-200落射荧光显微镜购于成都市苏净科学器材有限公司;QP-04全自动冷冻切片机购于湖北泉林医疗设备有限公司等 ......