范雁东 王佳明 马木提江·木尔提扎 罗坤

    脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是指交通事故、战时、自然灾害等造成的脊柱骨折,合并脊髓和神经根损伤,是一种破坏性的神经和病理状态,可导致主要的运动、感觉和自主神经功能障碍[1]。全球范围内SCI的发病率为10.4～83.0例/百万/年,是社会发病负担的重要来源。对于急性SCI的管理策略包括早期手术减压和固定、使用血管加压药物增加平均动脉血压、使用皮质类固醇等,最近使用去甲肾上腺素作为神经重症监护策略,但对神经保护和再生的作用有限[2],因此,需要探索新型治疗制剂。有研究发现,胡黄连苷Ⅱ(picroside Ⅱ,PⅡ)是从胡黄连提取的环烯醚萜类化合物,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡活性,能够抑制脊髓反应性星形胶质细胞介导的神经炎症,减轻慢性缩窄性损伤诱导的大鼠神经性疼痛[3],但对SCI神经功能的研究较少。此外,激活环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号可以改善SCI后炎症[4],PⅡ是否能通过调节cAMP/PKA通路改善SCI神经功能尚不清楚,因此,本研究借助SCI大鼠模型,探究PⅡ对其神经功能的影响及相关cAMP/PKA通路的调节作用,以期为临床治疗提供更多参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SD雄性大鼠(220～240 g),购自河南省实验动物中心[SCXK(豫)-2022-0001]。饲养环境为12 h/12 h光暗循环,温度(25±1)℃,湿度(50±5)%,实验操作遵守相关规定。

    1.2 试剂 PⅡ(纯度≥98%,G0174),购自美国Merck公司;PKA抑制剂H-89(HY-15979),购自美国MCE公司;劳克坚牢蓝(LuxolFastBlue, LFB)染液,购自南京信帆生物技术有限公司;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、cAMP ELISA试剂盒,购自北京四正柏有限公司;一抗磷酸化(p)-PKA、PKA、p-环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(CREB)、CREB,购自美国Abcam公司。

    1.3 方法

    1.3.1 造模与分组:①造模:大鼠吸入乙醚至完全麻醉后,俯位固定,背部剃毛并消毒,计数肋骨以确定(第10胸椎)T10水平,以T10水平为中心作3 cm长纵向切口,剥离椎旁肌,去除棘突和椎板,暴露(第9胸椎)T9～T10节段脊髓;在3 cm高度使10 g NYU打击器自由下落击打T9～T10节段脊髓,随后脊髓充血、水肿,大鼠后肢和尾部抽搐,表示SCI大鼠模型建立成功[5] ......