史嘉翊 宋旭东 初文竹 邱羽菲 潘 宇 曹志琴 吴 丹

    (1 牡丹江医学院生命科学学院 黑龙江 牡丹江 157011 2 牡丹江医学院第一临床医学院 黑龙江 牡丹江 157011)

    肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是肝脏损伤后进行自我修复过程中的一种反应，主要表现为在细胞外基质(extracellular matrix ECM)的累积后形成瘢痕。肝纤维化在早期阶段是一种对肝损伤的自我愈合和修复，但长期的肝纤维化最终可能会演变为肝硬化，伴随着一系列并发症的出现，比如腹水，消化道出血，肝性脑病，最严重的将演变成肝癌。转化生长因子β1(transforming growth factor-β TGFβ1)是一类重要的细胞因子，它参与了生命体的分化和调节，研究证实TGFβ1是导致肝纤维化最主要的因子。

    潜肽相关肽LAP(latent assotiated peptide)与TGFβ1以非共价键结合形成没有活性的潜态复合物，LAP位于复合物的N端。当复合物被释放到细胞外时，在整合素或者蛋白酶等的作用下，将LAP断裂，释放出具有活性的TGF-β1[1]。LAP从而具有竞争抑制TGF-β1活性从而具有抑制肝纤维化的能力。本实验室设计了全长和截断型两种LAP，分别命名为LAP-F与LAP-B，并进行了表达纯化。对考察其对人肝脏细胞LX-2增殖的影响，考察其细胞毒性，是否具有可以成为抗纤维化的新型蛋白药物的潜力。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    LAP-F与LAP-B重组质粒， LX-2细胞株(中国科学院上海细胞库)

    1.2 主要试剂与仪器

    蛋白胨、酵母提取物(Oxoid); 氯化钠(Solarbio); 苯甲基磺酰氟(PMSF)(Thermo Scientific); 异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)(biofroxx);镍亲和层析柱(上海凯杰生物有限公司); 咪唑(Imidazole)(Solarbio) 蛋白分子量Marker (Bio-rad); DMEM、胰蛋白酶、胎牛血清(HyClone); MTT试剂(Solarbio);恒温摇床、离心机(Eppendorf); 倒置生物显微镜(Olympus); 二氧化碳培养箱(Thermo Scientific) ......