中药抗癌灵对肝癌SMMC7721细胞增殖的影响(2)
(3)细胞抑制试验(MTT法) 将对数生长期的SMMC7721细胞移入96孔培养板中，细胞密度约为1×104个/ ml，每孔加入200 μl细胞悬液，培养24 h。吸弃孔内原培养液，加入含抗癌灵提取液的10%FBS的RPMI 1640培养液200 μl，每个药物浓度设4个平行复孔。培养到20 h，每孔加入MTT(5 mg/ml)20 μl，继续培养4 h后终止培养，小心吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO 150 μl，用震荡混合仪震荡10 min，使结晶充分溶解。选择492 nm波长酶标仪测定每孔光吸收值(OD值)。实验重复2次。按下列公式计算抑制率：抑制率(%)=(1-实验组OD值/对照组OD值)×100%。(4)流式细胞仪检测细胞凋亡 药物作用24 h后，收集各组细胞约2×105个，1 000 r/min离心5 min，弃去培养液；PBS冲洗两次,加入70%预冷的乙醇固定，4℃，1～24 h；离心弃去固定液，PBS冲洗去乙醇；PBS重悬细胞，400目筛网过滤1次，离心弃去PBS；加入RNase A (终浓度为60 μg/ml) ......
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