信号转导和转录激活因子4及γ-干扰素在银屑病患者皮损中的表达及其意义(2)
(4)逆转录反应：取4 μl RNA模板做逆转录反应，仪器为PE9700 PCR仪，反应体系如下： 5×逆转录buffer 4 μl,上游引物(10 pM/μl)0.4 μl,下游引物(10 pM/μl)0.4 μl,dNTPs(25 mM)0.2 μl,MMLV(10 U/μl)1 μl, DEPC水10 μl,总体积20 μl。反应条件：37℃ 1 h，然后95℃3 分钟。(5)荧光定量PCR反应体系进行：由荧光定量仪PE 7000型PCR扩增仪扩增完成。反应体积为50μl，反应体系：5×定量PCR buffer 10μl,上游引物F1 μl，下游引物R 1 μl，dNTPs 0.5 μl，荧光探针1 μl，Taq 酶1.5 μl，cDNA 5 μl，ddH2O 30 μl。反应条件为：93℃ 2分钟，然后93℃45秒，55℃45秒，共40个循环。反应结束后，计算待测样本STAT4 mRNA及IFN-γmRNA表达量(copy/μg RNA)。
3.统计学分析 采用SAS 8.01 for window 统计软件进行统计分析 ......
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