1.2 方法

    1.2.1 标本采集 所有病例入院后次日清晨采集空腹抗凝血2 mL，2小时内4℃，2500 rpm离心10分钟，吸取上层黄色血浆-80℃冻存。剩余血细胞按红细胞裂解法分离获得白细胞，加入1 mL Trizol吹打混匀得到白细胞Trizol混合液，-80℃冻存备用。

    1.2.2 实时荧光定量PCR检测miRNA-492的表达 23例MPP组及20例NC组的白细胞Trizol混合液冰上溶解，提取并纯化RNA，分光光度计测定RNA的质量和浓度。miRNA-492以U6为内参，HMGB1以β-actin为内参，按照灏勤生物公司miRNA/mRNA实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试剂盒说明书测定样本中miRNA-492及HMGB1的表达，采用相对表达量2-△△Ct法比较各基因的表达差异。

    1.2.3 流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群 淋巴细胞亚群的检测运用BD FACSCalibur公司流式细胞仪进行多参数分析。

    1.2.4 ELISA 檢测 采用联科生物技术公司 ELISA试剂盒检测血浆 TNF-α、IL-6表达水平，具体操作方法严格按照说明书步骤进行 ......