茅凌翔，邹欣然，吴静，顾佳奇

    (江苏大学附属昆山医院暨昆山市第一人民医院检验科，江苏昆山215300)

    核酸适配体(aptamer)是通过指数富集的配体系统进化技术(systemematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)筛选获得的、长度为10～100 nt的、能够特异性结合靶标物质的单链寡核苷酸(ssDNA或RNA)，可以通过其自身形成的三级结构特异性的识别并结合靶分子。SELEX技术是利用人工合成的寡核苷酸文库，进行核苷酸和靶分子的结合、分离、富集、扩增的多轮循环。这个寡核苷酸文库包括1014～1017条随机的ssDNA或RNA，每条寡核苷酸的中间部分是长度为30～100 nt、可与靶分子结合的随机序列，两端是18～30 nt的、用于PCR扩增的固定序列[1]。适配体由于具有类似于抗体的特性而被称为“化学抗体”，可以很好地特异性结合靶标物质靶物质；同时，适配体还有一些优于抗体的特性，比如免疫原性低、稳定性高、靶分子范围广泛、易于制备与修饰等。因此，核酸适配体可以被广泛用于临床诊断[2]与治疗[3]、食品安全检测[4]和环境监测[5-6]等众多领域。

    肠道病毒71型(enterovirus A71，EV-A71)属于小RNA病毒科，肠道病毒属A组，是丙类传染病手足口病(HFMD)的主要病原体。在手足口病的多种病原体中，EV-A71和柯萨奇病毒A16(Coxsackie virus A16，CV-A16)是其最主要的病原体，两者感染的比例分别占大约43.3%和24.8%[7]；由于EV-A71独特的嗜神经性，其相较其他病原体更容易感染中枢神经系统，引发重症手足口病，甚至危及患儿生命，严重危害婴幼儿的健康[8]。因此，对EV-A71早期准确的诊断显得尤为重要。目前，针对EV-A71的临床检测方法主要为荧光定量PCR法，但由于对实验仪器和实验室的要求较高，难以在基层开展。为了今后进一步开发基于适配体的EV-A71检测方法，本研究拟通过SELEX技术筛选对EV-A71衣壳蛋白VP1的适配体。

    在本实验部分中，我们将重组质粒pET-32a-VP1导入大肠杆菌中成功表达了EV-A71病毒的VP1衣壳蛋白，考虑到CV-A16和EV-A71结构蛋白存在相似性，为避免假阳性，尽可能地排除相似物质带来的干扰，我们选取EV-A71的VP1蛋白为正向选择蛋白，以CV-A16的VP1为反向选择蛋白，利用SELEX技术进行了EV-A71的适配体筛选，并成功筛选得到了3条EV-A71衣壳蛋白VP1的特异性适配体 ......