余 斌，王一淇，张廷志，颜少慰，徐筱群

    (水羊化妆品制造有限公司研发中心，湖南 长沙 410000)

    氧化应激是指动物机体受到有害刺激时，体内的自由基(ROS、RNS)产生量超过机体的清除能力，导致氧化还原系统失衡，最终导致细胞质、蛋白质及核酸受损，引发细胞凋亡和损伤。研究表明，皮肤的衰老、暗沉、敏感等问题均与氧化应激有着密不可分的联系。近年年来，各种宣称具有抗氧化的功效成分应用于皮肤化妆品中，深受消费者青睐。Nrf2-ARE(核因子E2相关因子2，nuclear factor erythroid-2 related factor 2，Nrf2；抗氧化反应元件，antioxidant response element，ARE)被认为是机体内最重要的抗氧化信号通路。机体在抵抗和防御外界有害气体、重金属等刺激时，Nrf2-ARE对其所导致的外源性损伤起着非常重要作用的信号通路，也是近年来抗氧化应激领域的研究热点。正常情况下，Nrf2与Keap1形成的二聚体与胞浆中的肌动蛋白结合并锚定在细胞胞浆中，处于无活性状态。当机体受到刺激产生氧化反应时，ROS和RNS可使Keap1构象改变，使Nrf2-Keap1二聚体解偶联，促进Nrf2磷酸化和进入细胞核。Nrf2稳定增加并与亲电效应原件ARE结合，从而启动其下游抗氧化应激酶和Ⅱ相解毒酶基因的转录，编码产生抗氧化蛋白，达到抗氧化应激的作用。因此，Nrf2-ARE也被作为一个研究的药物靶点，探索诸多活性成分对其的作用，在肿瘤、抗炎症、呼吸系统、神经退行性疾病等的预防和治疗中得以应用。本研究以乳酸杆菌发酵产物、α-硫辛酸、维生素C乙基醚以及还原型谷胱甘肽为原料制备了一种抗氧化组合物，以期为Nrf2-ARE通路的研究以及抗氧化组合物性能的开发与应用研究提供试验基础与科学依据，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 试剂：肌肤源力因子(α-硫辛酸、乳酸杆菌发酵产物、维生素C乙基醚、还原型谷胱甘肽)(水羊股份集团有限公司)；人永生化角质形成细胞(Procell公司)；DMEM高糖培养基(Gibco公司)；DMSO、NaHCO(沪试公司)、ELISA试剂盒(ROS、T-AOC)、磷酸盐缓冲溶液(索莱宝公司)；ELISA试剂盒(Nrf2)(武汉赛培生物科技有限公司)。仪器：酶标仪(赛默飞公司，沪械注准20182400073，型号：VARIOSKANLUX)；二氧化碳恒温培养箱(GER IRM公司)；倒置显微镜(奥林巴斯公司，国械注进20162220641，型号：CKX-53)；漩涡混合仪(IKA公司 ......