于甜甜，杨 燕，赵珊珊，郭 凯，殷金岗，林梦君，崔本文，姬胜利

    (润辉生物技术有限公司，山东 威海 264207)

    皮肤衰老是多种因素引起的退行性过程，与慢性炎症有着密切联系。随着年龄的增长，体内氧化还原平衡能力失调，激活促炎信号通路，导致促炎介质(如IL-1、IL-6和TNF-α等)水平不断提高。多聚脱氧核糖核酸(polydeoxyribonudeotid，PDRN)来自于三文鱼精子，是分子量在50～1500 KDa的脱氧核糖核酸聚合物，具有组织修复、抗炎、促血管生长等多种活性功能。在韩国、日本、欧洲等国家，PDRN已广泛应用于医药、化妆品、医疗器械等各个领域中。PDRN由脱氧核糖核酸酶酶解，产生单脱氧核苷酸或寡脱氧核苷酸，通过激活嘌呤能受体，来刺激成纤维细胞增殖、迁移、血管生成以及核酸的合成，从而促进伤口愈合。PDRN还是一种A2A受体激动剂，该受体的刺激可以减少炎症细胞因子的分泌，有效抑制IL-6和TNF-α的表达，同时可以降低瘢痕的形成。PDRN的制备方法有很多，但大多都存在一定的缺陷。现有制备PDRN技术的提取收率低，在较高温度下使用酸降解DNA降低分子量的过程中需高温反应条件以及加碱中和和超声波分解破碎过程中产生局部高温，易发生美拉德反应，导致产品颜色发黄，影响产品质量。润辉生物技术有限公司对上述制备方法进行了改进，采用了温和的酶切法制备PDRN，此方法可以去除部分导致过敏反应的嘌呤碱基，增加产品的安全性，同时可提高收率，解决高温易降解、产品易泛黄等问题。本研究主要对PDRN的工艺改进及其功效进行分析，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料、试剂与仪器材料 PDRN(批号：RN01-211211)，润辉生物技术有限公司；地塞米松(批号：WXBD3340V)，Sigma；脂多糖(LPS，批号：820F036)，北京索莱宝科技有限公司；DMEM高糖基础培养基(批号：WH0021D231)，武汉普诺赛生命科技有限公司；胎牛血清(批号：21090701)，浙江天杭生物科技有限公司；CCK-8细胞毒性及细胞增殖试剂盒，上海碧云天生物科技有限公司；Mouse IL-6 ValukineTMELISA(批号：600404)，R&D；Mouse TNF-alpha ValukineTM ELISA(批号：600409) ......