童宇轩，杨志惠，汪少华

    (西南医科大学附属医院病理科，四川 泸州 646000)

    exosomes是直径约为3～100 nm的小囊泡，不同来源的活细胞均可分泌[1-3]。其中，肿瘤细胞来源的exosomes包含许多肿瘤相关的抗原，如TSG101、Alix、Hsp60、Hsp70、Hsp90和CD9等免疫分子，其可以诱导产生特异性免疫反应，起到抑制肿瘤的作用[4]。肿瘤细胞也能分泌exosomes瘤苗，并诱导特异性免疫效应，其抗肿瘤作用已在老鼠和人身上得到证实[5]，但腹水来源的exosomes是否也可作为肿瘤疫苗诱导特异性T细胞反应、抑制肿瘤生长尚不明确。因此，本研究首先通过超速离心分别获得腹水来源的exosomes和小鼠肝癌细胞H22来源的exosomes，然后在小鼠肝癌皮下移植瘤模型体内探索exosomes作为肿瘤疫苗激活机体的抗肿瘤免疫效应的价值，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株及动物 小鼠肝癌H22细胞株由重庆医科大学干细胞与组织工程研究室惠赠，本室复苏后保存。6～8周龄的BALB/c小鼠(18±2)g购于重庆医科大学的医学实验动物中心，饲养环境：温度(25±2)℃，湿度(50±10)%，12 h 明暗交替。本研究通过动物伦理审批。

    1.2 试剂 胎牛血清(中国杭州四季青生物医学公司)；RPMI1640培养基(美国GIBCO公司)；小鼠淋巴细胞分离液(中国天津TBD生物公司)；小鼠血清IL-2和INF-γ的ELISA检测试剂盒(中国广州晶美生物医学公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)。

    1.3 实验仪器 倒置显微镜(日本Nikon)；精密电子天平(中国北京塞多利斯仪器厂JA5003型)；CO2培养箱(美国NURARE)；无菌超净工作台(中国苏州净化公司)；LTP-C型离心涂片机(中国北京四环科学仪器厂)；台式低温高速离心机(德国Heareus，Biofuge 15R型)。

    1.4 方法

    1.4.1细胞培养 取出液氮冻存的小鼠腹水型肝癌细胞株H22细胞，于37 ℃按步骤进行细胞复苏，加入培养液，放置于5% CO2、37 ℃、饱和湿度的培养箱中常规进行半开口的单层细胞培养。

    1.4.2腹水瘤动物模型的建立 首先将H22细胞系按照常规细胞培养的方式培养、传代，取其对数生长期的细胞台盼蓝染色，于显微镜下计数细胞。取0.2 ml(约含1×108个瘤细胞)在无菌条件下 ......