荧光分析法在黄酮检测中的应用
【中国分类号】R392.6【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)10-0333-01
荧光指物质分子因吸收外来辐射的光子能量而从基态激发至激发态，再由第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁返回到基态而伴随的发光现象。利用物质的荧光特性对物质样品进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。荧光分析法具有高灵敏度、高选择性、信息量丰富、检测限低等众多优点。在20世纪70年代之后，有很多高灵敏度的荧光分析法相继出现，在各个领域都有了很大应用。下面对荧光分析法在黄酮的检测中的应用进行简要的综述。
1 荧光分析法测定叶类植物中的总黄酮含量
葎草全草入药，具有清热解毒的功效，黄酮类化合物是葎草的主要有效成分。冯俊霞等建立了荧光分光光度法测定葎草叶中总黄酮含量的方法，使用F-4500型荧光分光光度计，考察了实验中的影响因素，确定了最佳条件为10%硝酸铝溶液的加入量为4ml，pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液与60%乙醇混合液为溶剂，静置时间为25分钟，以芦丁为标样，选择410nm和534nm为激发波长和发射波长。用此法检出的野生葎草叶中的总黄酮含量达52.98mg/g。
, 百拇医药
香椿叶提取物中的活性成分为黄酮类化合物，常永芳等选择436nm和505nm为激发波长和发射波长，95%乙醇为溶剂，加入pH7的三酸缓冲液，采用超声提取，芦丁为标样，测定香椿叶中总黄酮，方法的检测限为2.62×10-7mol/L。
沙棘叶因其活性成分为黄酮类化合物而被广泛应用于制药、保健食品和化妆品行业。曹叶霞等研究了用荧光分光光度法测定沙棘叶中的总黄酮，以芦丁为标准样品，研究了溶剂、pH值、表面活性剂及放置时间对荧光强度的影响。选择437nm和516nm为激发波长和发射波长。检测限达到3.2×10-6mol/L。实验采用了超声提取的方法，以95%乙醇为溶剂提取3小时，加入pH值为7的三酸缓冲液。
桑叶具有疏风清热的功效，为常用中药，黄酮类成分是主要有效成分之一。王艳研究了用荧光光度法测定桑叶中的总黄酮含量，以芦丁为标样，在436nm和483nm为激发波长和发射波长下测定，检出限达到1.36×10-9 mol/L。实验采用索氏提取，以65%乙醇为溶剂，加入5%三氯化铝溶液和pH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，同时考察了溶剂、静置时间对实验的影响，并考察了绿原酸对总黄酮测定的影响。
, 百拇医药
黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分，杜仲中黄酮类化合物含量的高低被用来作为判断杜仲生药及其相关产品的重要指标。张敏等用60%乙醇加热回流提取杜仲叶有效成分，以芦丁为标样，选择激发波长为436nm，发射波长为483nm，以荧光分光光度法测定杜仲叶中总黄酮含量，检出限为1.27×10-9 mol/L，平均回收率99.8%～104.2%。采用此法，排除了绿原酸的干扰，并考察了溶剂、pH值、三氯化铝用量、放置时间对荧光强度的影响，确定了最佳条件，提高了测定结果的准确性。
2 荧光分析法测定根类植物中的总黄酮含量
巴吐尔·买买提明等采用索氏提取法、超声提取法、回流提取法分别提取多序岩黄耆、天山岩黄芪根中总黄酮，并用荧光分析法测定了总黄酮含量。实验结果表明回流提取法为最佳提取方法，并比较了两种岩黄芪根中总黄酮的含量，实验选择436nm和483nm为激发波长和发射波长，选择pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液，70%的乙醇为溶剂，以芦丁作为标样。
, http://www.100md.com
丹参酮IIA是丹参中的主要有效成分，鉴于荧光分析法具有很高的灵敏度、选择性和特异性以及高效、痕量、自动化的特点，林美玉等建立了荧光分析法测定丹参酮IIA。实验表明，最佳激发波长和发射波长分别为330nm和410nm，最佳pH值为2。
3 荧光分析法测定果实类中的总黄酮含量
曹叶霞等研究了用荧光分光光度法测定山楂中的总黄酮，以金丝桃苷为标准样品，选择457nm和531nm为激发波长和发射波长。检出限达到2.4×10-7mol/L。实验采用了索氏提取的方法，以60%乙醇为溶剂提取3小时，体系的pH值为11.4，并加入葡萄糖、果糖、淀粉进行了干扰试验的考察。
4荧光分析法测定木类中的总黄酮含量
虎杖系蓼科蓼属小灌木，为传统中药。其提取物中的活性成分有白藜芦醇、蒽醌、黄酮等多种，现代药理证明白藜芦醇有抗菌消炎等作用。张敏等采用荧光分析法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量，检出限为8.839×10-10 mol/L，并用HPLC法进一步验证了荧光检测值得准确性，说明荧光法结果较为准确，能达到生产和科研的要求。
, 百拇医药
5其他
刺糖为豆科植物骆驼刺叶中分泌凝结而成的糖粒，是一味传统的维吾尔医药。李改茹等以芦丁为标样，在激发波长为432nm、发射波长为514nm条件下，采用荧光分析法测定了刺糖中黄酮类化合物的含量。
参考文献
[1]冯俊霞等.荧光分析法测定野生葎草叶中总黄酮的含量.安徽农业科学，2009,37(8)：3578～3579
[2]巴吐尔·买买提明等.荧光分析法测定岩黄芪根中的总黄酮含量.光谱实验室，2011，28(3)：1302～1305
[3]常永芳等.荧光分析法测定香椿叶中总黄酮含量的研究.安徽农业科学，2010，38(8)：4028～4029
[4]曹叶霞等.荧光分析法测定山楂总黄酮含量的研究.酿造科技，2006(9)：86～90
, 百拇医药
[5]曹叶霞等.荧光分析法测定沙棘叶中总黄酮的含量.中国酿造，2007(7)：62～64
[6]王艳.荧光分析法测定桑叶中总黄酮含量的研究.中国酿造，2008(11)：90～91
[7]张敏等.荧光法测定杜仲叶中总黄酮含量的研究.光谱实验室，2005(1)：54～57
[8]李改茹等.荧光法测定维药刺糖中黄酮类化合物含量.中国新药杂志，2010(22)：2103～2105
[9]张敏等.同步荧光检测虎杖提取物中白藜芦醇含量的新方法.林产化学与工业，2005(2)：63～66
[10]林美玉等.丹参酮IIA的荧光分析法研究.药学实践杂志，2011(1)：38～40, http://www.100md.com(孟繁姝 张金铎 王爱英)
荧光指物质分子因吸收外来辐射的光子能量而从基态激发至激发态，再由第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁返回到基态而伴随的发光现象。利用物质的荧光特性对物质样品进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。荧光分析法具有高灵敏度、高选择性、信息量丰富、检测限低等众多优点。在20世纪70年代之后，有很多高灵敏度的荧光分析法相继出现，在各个领域都有了很大应用。下面对荧光分析法在黄酮的检测中的应用进行简要的综述。
1 荧光分析法测定叶类植物中的总黄酮含量
葎草全草入药，具有清热解毒的功效，黄酮类化合物是葎草的主要有效成分。冯俊霞等建立了荧光分光光度法测定葎草叶中总黄酮含量的方法，使用F-4500型荧光分光光度计，考察了实验中的影响因素，确定了最佳条件为10%硝酸铝溶液的加入量为4ml，pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液与60%乙醇混合液为溶剂，静置时间为25分钟，以芦丁为标样，选择410nm和534nm为激发波长和发射波长。用此法检出的野生葎草叶中的总黄酮含量达52.98mg/g。
, 百拇医药
香椿叶提取物中的活性成分为黄酮类化合物，常永芳等选择436nm和505nm为激发波长和发射波长，95%乙醇为溶剂，加入pH7的三酸缓冲液，采用超声提取，芦丁为标样，测定香椿叶中总黄酮，方法的检测限为2.62×10-7mol/L。
沙棘叶因其活性成分为黄酮类化合物而被广泛应用于制药、保健食品和化妆品行业。曹叶霞等研究了用荧光分光光度法测定沙棘叶中的总黄酮，以芦丁为标准样品，研究了溶剂、pH值、表面活性剂及放置时间对荧光强度的影响。选择437nm和516nm为激发波长和发射波长。检测限达到3.2×10-6mol/L。实验采用了超声提取的方法，以95%乙醇为溶剂提取3小时，加入pH值为7的三酸缓冲液。
桑叶具有疏风清热的功效，为常用中药，黄酮类成分是主要有效成分之一。王艳研究了用荧光光度法测定桑叶中的总黄酮含量，以芦丁为标样，在436nm和483nm为激发波长和发射波长下测定，检出限达到1.36×10-9 mol/L。实验采用索氏提取，以65%乙醇为溶剂，加入5%三氯化铝溶液和pH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，同时考察了溶剂、静置时间对实验的影响，并考察了绿原酸对总黄酮测定的影响。
, 百拇医药
黄酮类化合物是杜仲的主要有效成分，杜仲中黄酮类化合物含量的高低被用来作为判断杜仲生药及其相关产品的重要指标。张敏等用60%乙醇加热回流提取杜仲叶有效成分，以芦丁为标样，选择激发波长为436nm，发射波长为483nm，以荧光分光光度法测定杜仲叶中总黄酮含量，检出限为1.27×10-9 mol/L，平均回收率99.8%～104.2%。采用此法，排除了绿原酸的干扰，并考察了溶剂、pH值、三氯化铝用量、放置时间对荧光强度的影响，确定了最佳条件，提高了测定结果的准确性。
2 荧光分析法测定根类植物中的总黄酮含量
巴吐尔·买买提明等采用索氏提取法、超声提取法、回流提取法分别提取多序岩黄耆、天山岩黄芪根中总黄酮，并用荧光分析法测定了总黄酮含量。实验结果表明回流提取法为最佳提取方法，并比较了两种岩黄芪根中总黄酮的含量，实验选择436nm和483nm为激发波长和发射波长，选择pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液，70%的乙醇为溶剂，以芦丁作为标样。
, http://www.100md.com
丹参酮IIA是丹参中的主要有效成分，鉴于荧光分析法具有很高的灵敏度、选择性和特异性以及高效、痕量、自动化的特点，林美玉等建立了荧光分析法测定丹参酮IIA。实验表明，最佳激发波长和发射波长分别为330nm和410nm，最佳pH值为2。
3 荧光分析法测定果实类中的总黄酮含量
曹叶霞等研究了用荧光分光光度法测定山楂中的总黄酮，以金丝桃苷为标准样品，选择457nm和531nm为激发波长和发射波长。检出限达到2.4×10-7mol/L。实验采用了索氏提取的方法，以60%乙醇为溶剂提取3小时，体系的pH值为11.4，并加入葡萄糖、果糖、淀粉进行了干扰试验的考察。
4荧光分析法测定木类中的总黄酮含量
虎杖系蓼科蓼属小灌木，为传统中药。其提取物中的活性成分有白藜芦醇、蒽醌、黄酮等多种，现代药理证明白藜芦醇有抗菌消炎等作用。张敏等采用荧光分析法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量，检出限为8.839×10-10 mol/L，并用HPLC法进一步验证了荧光检测值得准确性，说明荧光法结果较为准确，能达到生产和科研的要求。
, 百拇医药
5其他
刺糖为豆科植物骆驼刺叶中分泌凝结而成的糖粒，是一味传统的维吾尔医药。李改茹等以芦丁为标样，在激发波长为432nm、发射波长为514nm条件下，采用荧光分析法测定了刺糖中黄酮类化合物的含量。
参考文献
[1]冯俊霞等.荧光分析法测定野生葎草叶中总黄酮的含量.安徽农业科学，2009,37(8)：3578～3579
[2]巴吐尔·买买提明等.荧光分析法测定岩黄芪根中的总黄酮含量.光谱实验室，2011，28(3)：1302～1305
[3]常永芳等.荧光分析法测定香椿叶中总黄酮含量的研究.安徽农业科学，2010，38(8)：4028～4029
[4]曹叶霞等.荧光分析法测定山楂总黄酮含量的研究.酿造科技，2006(9)：86～90
, 百拇医药
[5]曹叶霞等.荧光分析法测定沙棘叶中总黄酮的含量.中国酿造，2007(7)：62～64
[6]王艳.荧光分析法测定桑叶中总黄酮含量的研究.中国酿造，2008(11)：90～91
[7]张敏等.荧光法测定杜仲叶中总黄酮含量的研究.光谱实验室，2005(1)：54～57
[8]李改茹等.荧光法测定维药刺糖中黄酮类化合物含量.中国新药杂志，2010(22)：2103～2105
[9]张敏等.同步荧光检测虎杖提取物中白藜芦醇含量的新方法.林产化学与工业，2005(2)：63～66
[10]林美玉等.丹参酮IIA的荧光分析法研究.药学实践杂志，2011(1)：38～40, http://www.100md.com(孟繁姝 张金铎 王爱英)