非小细胞肺癌组织中D2-40标记阳性淋巴管密度和E-钙黏蛋白的表达及其临床意义研究(2)
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1.2方法:(1)试剂来源 D2-40抗体(1:50抗体编号MAB-0567)、E-cadherin抗体(1:50抗体编号MAB-0247)及SP抗体检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。(2)实验方法 标本经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚3μm，脱蜡水化，柠檬酸缓冲液高压修复，SP法免疫组化染色，DAB染色，苏木精对比染色，脱水透明，中性树胶封固。用已知阳性切片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定:(1)D2-40标记LVD阳性计数 D2-40阳性：淋巴管内皮细胞的胞浆染成棕黄色，光镜下观察阳性淋巴管呈扩张状或闭塞条索状，管壁为单层扁平上皮，较薄，周围无明显的基底膜及平滑肌细胞，管腔中无红细胞(见图1)。LVD计数采用Weidner等(1992年)报道的方法，先在低倍镜下(×40)分别选取肿瘤边缘和肿瘤中心淋巴管高密度区，然后在高倍镜(×400)下分别计数被染色的淋巴管数目，每个染成棕色的内皮细胞或内皮细胞簇亦视为一个淋巴管，计数3～5个高倍视野下的淋巴管数目，取其平均值作为该例的LVD，单位(个)[3]。(2)E-cadherin的表达 E-cadherin阳性产物分布于细胞膜上 ，为粗细一致的棕黄色颗粒。高倍镜下随机计数5个不同视野，每高倍视野计数100个瘤细胞，以阳性细胞占全部瘤细胞的百分比判断。无着色为(-)，阳性细胞≤25%为(+)，26%～75%为(++)，≥76%为(+++)。将(-)～(+)归为reduced expression，将(++)～(+++)归为normal expression[4] 。具体见图2、图3。
1.4 统计学方法:应用SPSS 16.0统计软件。计量资料以(X±S-)表示，采用单因素方差分析(one way anova)。率的比较采用x2 检验，D2-40标记阳性LVD数量与E-cadherin异常表达之间的关系用采用x2 检验 ......
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