王海业 麻颖宜

    Rho家族又称Rho GRP酶，是一类GTP结合蛋白，具有GTP酶活性，在细胞增殖、分化、凋亡、运动转移和和血管生成等多种过程中发挥着关键作用[1]。Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)是Rho家族成员，被证实在胃癌[2]、皮肤癌[3]和卵巢癌[4]等多种肿瘤中异常高表达，可通过调控细胞增殖、转移和凋亡等在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。近年有研究指出，Rac1在口腔鳞状细胞癌中高表达，但其在口腔癌进展中的具体作用尚不明确[5]。口腔鳞状细胞癌是口腔癌中最为常见的病理类型，约占口腔癌的90%以上[6]。本研究以人口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞为研究对象，采用小干扰RNA(siRNA)技术靶向抑制细胞中Rac1的表达，观察Rac1对HSC-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，并探讨其可能的分子机制，以期为口腔癌的治疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1细胞、试剂与仪器 HSC-3细胞株购于美国ATCC，RPMI-1640培养基购于美国Gibco公司；胎牛血清购于美国Hyclone公司，胰蛋白酶购于中国碧云天公司，青霉素、链霉素购于上海先锋药业公司，Rac1抗体购于美国Proteintech公司，PVDF膜购于美国Millipore公司，脱脂奶粉购于瑞士Nestle公司，siRNARac1及其阴性对照siRNA-NC购于上海吉玛制药公司，β-catenin、c-Myc、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和GAPDH等抗体均购于美国Santa Cruz公司，HRP-羊抗兔二抗购于美国Zymed公司，脂质体2000和RNA提取试剂盒购于美国Invitrogen公司。RIPA裂解液、CCK-8、超敏ECL发光和BCA蛋白浓度测定等试剂盒均购于上海Beyotime公司，细胞凋亡检测试剂盒购于中国万类生物公司，RT-PCR试剂盒购于上海Transgene公司；Transwell小室购于美国Costar公司，ELX800酶标仪购于美国Biotek公司，WD-9413B凝胶成像系统购于北京六一仪器厂，NaoDrop 2000紫外分光光度计购于美国Thermo公司，9700PCR仪购于美国ABI公司，PY-16电热恒温培养箱购于美国Crystal公司。

    1.2实验方法

    1.2.1HSC-3细胞培养、分组与转染 在37℃和5%CO2的常规培养条件下以含10%胎牛血清、100 μg/ml链霉素和100 U/ml青霉素的RPMI-1640培养基培养HSC-3细胞。接种适量的对数生长期HSC-3细胞于6孔细胞板上 ......