邓玉皎，李 娜，朱文革，代志军,3*

    1.西安交通大学第二附属医院肿瘤病医院(西安 710004)

    2.乔治华盛顿大学生化与分子生物学系(华盛顿 20052)

    3.浙江大学医学院附属第一医院乳腺外科(杭州 310003)

    乳腺癌是女性发病率第一、死亡率第二的癌症[1]，其疾病负担在全球范围内均较重[2]。它的发生是遗传、环境等多因素协同作用的结果[3]。从基因到蛋白质存在转录、翻译及翻译后水平的调控过程，研究表明组织中mRNA丰度与蛋白质丰度并不完全符合[4]。据报道，基因与翻译后蛋白质的表达水平之间的相关性仅为0.4-0.5，基因无法解释一切表型。蛋白质翻译后修饰(Posttranslational modifications，PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程，通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团，可以改变蛋白质的理化性质，进而影响蛋白质的空间构象和活性状态，亚细胞定位及蛋白相互作用。目前已知的PTM有300多种，但只有少数被研究，包括磷酸化、乙酰化、泛素化、N-糖基化、琥珀酰化、丙酰化等[5]。PTM是增加蛋白质多样性的关键机制，其复杂性和动态性是蛋白质研究的难点[6]。蛋白质磷酸化是生物界最普遍、最重要的一种PTM，约30%的人类蛋白质组被磷酸化，几乎参与细胞所有的生命活动过程，如细胞分裂、蛋白分解、信号传导、基因表达调控和蛋白相互作用等[7]。与其他PTM相似，磷酸化是一个可逆的生物化学过程，激酶和磷酸酶在磷酸化位点水平上竞争以调节磷酸化状态。然而，磷酸化蛋白质的丰度低，通常低至1%，而且同一个蛋白质中也可能存在不同的磷酸化类型，其精准分析困难大。磷酸化蛋白组学是蛋白组学的一个分支，其核心挑战是蛋白质组中低丰度磷酸化多肽的富集和高灵敏的检测手段。现对近年来磷酸化蛋白质组学技术在乳腺癌诊断及治疗研究中的进展作一综述。

    1 磷酸化蛋白组学技术的研究现状

    1.1 磷酸化多肽样本的前处理

    蛋白质组学的研究需要高分离效率、高灵敏度、高通量、宽动态范围分析技术的支持[8]。一般由三大技术所支撑：蛋白质提取与纯化、质谱(Mass spectrometry，MS)技术鉴定蛋白、以及利用生物信息学技术进行蛋白质相关数据的比对分析[9]。提取磷酸化蛋白的组织样本及细胞均需用蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂进行保存及处理，避免反复冻融，严格冰上操作，采用剧烈变性条件，尽量加快处理速度，以减少磷酸化多肽的降解及损失。蛋白提取后需用适当的蛋白酶(胰蛋白酶最常用)消化 ......