朱 贝 韩双印 杨亚莉

    (1.新乡医学院 河南 新乡 453000；2.河南省人民医院 河南 郑州 450000；3.新乡市第一人民医院 河南 新乡 453000)

    胃癌是发病率较高的恶性肿瘤，由于前期症状不明显，易与其他慢性病混淆，多数患者至疾病晚期才得到诊断[1-2]。手术、放疗和化疗是目前胃癌治疗的主要方法，尽管能起到一定效果，但仍未明显改善患者预后[3]。基于嵌合抗原受体修饰T细胞或NK细胞是近年快速发展的免疫治疗新技术，在血液肿瘤中已取得良好的抗肿瘤作用。然而，在实体瘤中仍面临很大挑战。MUC1是在多种肿瘤表面表达的肿瘤相关抗原，靶向MUC1的各种免疫治疗策略已在实验室和临床试验中展开[4]。本研究制备靶向MUC1的CAR-NK细胞，观察其对MGC-803裸鼠模型的抑瘤作用，为胃癌的细胞免疫治疗探索新方法。

    1.材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物：6～8周龄，体重为20±2g的SPF级成年雄性BALB/c(nu)小鼠48只，均购自凯学生物科技(上海)有限公司。

    1.1.2 主要实验细胞：人胃癌MGC-803和靶向MUCI的CAR-NK细胞均由本实验室提供。

    1.2 实验方法

    1.2.1 MGC-803培养：将人胃癌细胞株MGC-803常规培养、传代，取对数生长期细胞，PBS 洗涤3次，台盼蓝染色法检测其细胞活力，调细胞浓度为1×105/ml。

    1.2.2 靶向MUC1的 CAR-NK细胞培养：取出冻存细胞，置于37℃恒温水浴中快速融化，于超净工作台内将细胞悬液吸出置于15ml离心管中，加入10ml RPMI l640培养基1000rpm/min离心5min洗涤 ......