碘化油乳化三氧化二砷栓塞对兔VX2肝癌模型的疗效研究
 |
 |
[摘 要]目的 观察碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞实验兔肝种植瘤灶的疗效。方法40只VX-2兔肝模型，行肝动脉插管后随机分为A、B、C、D四组即碘化油乳化As2O3组、生理盐水组、碘化油组和As2O3组，术前、术后7d分别采耳静脉血测前白蛋白(PA)、白细胞计数，2周后处死实验兔取瘤灶测其体积，行病理学检查。结果 碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞组无腹水及转移，在肿瘤体积变化与各对照组相比较差异有统计学意义(p<0.001)；病理示A组种植结节呈坏死无结构样表现，坏死灶周围见假包膜之层状纤维细胞，见淋巴细胞、浆细胞，只有散在活肿瘤细胞。而各对照组瘤结节中心呈程度不一坏死无结构样表现，而其周缘区少许淋巴细胞、浆细胞，仍见活体瘤组织，尤以B组为甚，D组次之。碘化油乳化As2O3组用药3d时前白蛋白比治疗前稍降低，但其差异无统计学意义(p=0.825)，而7d时其前白蛋反而高于治疗前及用药3d值，其差异有统计意义(p<0.001)，其各时间值与单用碘油及单用As2O3比较差异无统计学意义(p>0.05)，另外各组不同时间白细胞变化差异无统计学意义(p>0.05)。结论 碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞治疗实验兔肝种植瘤灶是安全有效的。其疗效优于对照组。
关键词：肝癌 栓塞 三氧化二砷 动物实验
中图分类号：R735.7 文献标示码：B 文章编号：1005-0019(2008)4-0086-03
经肝动脉灌注化疗并碘油栓塞治疗肝癌已成为中、晚期肝癌有效的姑息治疗手段已得到公认。体内外实验及临床应用均证实As2O3具有选择性的抗肝癌作用，但其抗肿瘤作用具有时间及剂量信赖性[1]。将二者联合是否进一步提高肝癌姑息治疗效果，基于此问题，本课题设想并通过动物实验初步观察碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞实验兔肝种植瘤灶的疗效，为临床姑息治疗中晚期肝癌提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
由广州医学院实验动物中心提供新西兰大白兔40只，雌雄不限，4～6月龄，体质量2.1～3.4kg。兔VX2肿瘤株由中国医学科学院协和医科大学病理研究室提供。国产40%碘油(上海信谊药厂)，乳化剂为司盘-80(上海大众制药厂)；As2O3分析纯(湖南衡阳市凤凰化学工业厂)。聚乙烯导管(德国Neolab公司)，其内径0.28mm，外径0.61mm。检测PA的试剂由英国RANDOX公司提供。
1.2 制剂配制
碘化油乳化As2O3乳剂：将As2O3溶入生理盐水中，再与等体积的碘油混合，乳化剂的含量为10%，用“泵法”[2～3]来回推抽20次，配制成40%碘油As2O3乳剂。
1.3 VX-2兔肝癌模型的建立
40只实验大白兔按瘤块包埋法[4]制备VX2兔肝癌模型。
1.4 实验分组及处理
载瘤兔常规饲养2周，再次剑突下切口，显露肝门，探视瘤灶，以微细穿刺针穿刺肝固有动脉，置入1.2F微管插至肝动脉左支，注入亚甲蓝观察供血区域，并行动脉造影观察。40只载瘤兔，其中8只插管不成功，剩余32只采用数字表法完全随机分为A、B、C、D组，每组8只。A组：有药组，经肝动脉左支导管内缓慢推注0.3ml/kg碘化油乳化As2O3，用生理盐水冲洗微型 导管后拔出导管；B、C、D组方法同A组，药物分别改推10ml生理盐水、0.3ml/kg碘化油、10ml生理盐水含2mg/kg As2O3，关腹后常规术后处理。
术前、术后3d、7d分别抽取耳静脉血样测前白蛋白、白细胞计数。术后7d处死载瘤兔，开腹观察瘤灶大体表现，切下瘤灶所在肝叶送常规病理检查。
肿瘤体积计算：V=0.5×a×b2，其中V为体，a和b分别是肿瘤的最大和最小直径。
1.5 统计学处理
肿瘤体积两两比较用单因素方差分析，血清学值比较用重复测量方差分析。确定p<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 接种兔一般情况、种植灶大体形态学观察及插管和造影表现
本组40例观察期间荷瘤兔生长正常，种植2周后再次开腹探查见：实验兔肝内肿瘤均种植成功，接种成功率100%。少量血性腹水4例，肝内广泛转移1例；肿瘤呈结节状，略突出于肝表面，呈浅白色，均未突破肝包膜，质硬。共有7只实验兔肝动脉穿刺插管未成功，采血后随即处死，切取种植灶观察，7个瘤结节切面呈鱼肉状，境界清晰，瘤灶内无坏死，最大瘤体积493mm3，最小为1537mm3，平均为1822±692mm3，33只实验兔肝动脉穿刺插管成功(将33只肝动脉穿刺插管成功实验兔中随机去除1只，余32只随机分4组，故有效样本8只)，先注入亚甲蓝，观察肝脏表面染色区域覆盖肿瘤生长部位后固定导管，再导管注入造影剂，均见种植结节有丰富血供表现，呈结节状肿瘤实质浓积，其边缘欠清晰，肿瘤供血动脉支明显增粗。
2.2 实验兔栓塞术中及术后一般状况观察
术后3d内拒食，少动，消瘦。第4天开始进食，术后1周腹部切口全部愈合良好。
2.3 肝动脉栓塞后肝脏及瘤灶大体形态学表现
肝动脉栓塞1周后第3次开腹大体观察：8例中量血性腹水，1例肝内广泛转移，1例肝内腹膜广泛转移，见肝脏散在梗死灶，B组肿瘤结节明显增大，余各组种植结节突出明显减轻，尤以A组为甚。切取瘤结节测量其体积，正中切开肿瘤灶观察其剖面：A组标本均见瘤结节完全坏死，呈灰白豆渣样，假包膜形成，与正常肝实质有清晰境界，坏死物与假包膜易剥离。对照组实验兔瘤灶正中剖面观察窗见瘤结节中心不同程度坏死，坏死物呈灰白豆渣样，瘤灶周边仍见活体瘤组织，无假包膜形成，尤以B组为甚。兔VX2肝癌模型治疗前后肿瘤指标比较详见表1。
2.4 显微镜病理观察
实验组光镜下见种植结节呈坏死无结构样表现，坏死灶周围为层状纤维细胞，坏死灶周见淋巴细胞、浆细胞，散在活肿瘤细胞。各对照组中心程度不一坏死无结构样表现，而其周缘区少许淋巴细胞、浆细胞，仍见活体瘤组织，尤以B组为甚，D组次之，癌细胞呈巢状分布，细胞较大，形态不规则，排列紊乱，血窦多，胞核大而深染。
2.5 术前术后血前白蛋白、白细胞计数结果
用药组和各对照组于正常状态下(VX-2瘤株肝内种植前)、种植后2周、肝动脉栓塞后第3、7天静脉血测前白蛋白、白细胞结果见表2。
注：A、B、C、D组组间不同时间，各组间白细胞值两两比较，差异无显著性意义(P>0.05)，前白蛋白测量值A组种植后2周与栓塞后7天及栓塞后7天A组与B、C、D组两两比较，差异有显著性意义(P<0.05)。
3 讨论
肝癌的早期治疗仍是首选手术切除，但对中晚期伴有较严重肝硬化的肝癌病倒，局部、综合治疗已成为共识，本实验通过对用碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞治疗实验兔肝种植瘤灶的初步观察发表：
3.1 碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞实验兔肝种植瘤灶的疗效
有学者发表[5] As2O3 碘油栓塞治疗后残余肿瘤的凋亡增加，肿瘤细胞的增殖能力下降。本实验中用碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞组无腹水及转移，在肿瘤体积变化与各对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)；在光镜下实验组见种植结节呈坏死无结构样表现，坏死灶周围见假包膜之层状纤维细胞。坏死灶周见淋巴细胞、浆细胞，只有散在活肿瘤细胞。而各对照组光镜下瘤结节中心呈程度不一坏死无结构样表现，而其周缘区少许淋巴细胞、浆细胞，仍见活体瘤组织，尤以B组为甚，D组次之。其原因可能经肝动脉栓塞治疗，As2O3随栓塞的碘油沉积于肿瘤局部，As2O3在碘油中缓慢释放，可使肿瘤局部保持As2O3的有效浓度，持续较长时间，有助于发挥其抗肿瘤效应，既符合As2O3的作用具有时间及浓度依赖性特，又尽可能减少或延缓了单碘油TACE治疗后存活的肿瘤引起的肿瘤复发、转移。治疗组1周后血浆前白蛋白明显改善，且与生理盐水组相比明显升高，差异有统计学意义(p<0.05)，考虑与肝内种植瘤基本消除有关。
3.2 碘化油乳As2O3经肝动脉栓塞实验兔肝种植瘤灶对机体的影响
行肝动脉栓塞治疗肝癌，对机体最大的影响为对其肝功能的影响，而前白蛋白(PA)是一种主要由肝脏合成的且有较短生物半衰期(1.9d)的血浆蛋白，其血清含量的变化能较敏感、特异地反映肝细胞功能[6]。本实验结果提示：碘化油乳化As2O3组用药7d时其前白蛋高于治疗前及其他各组，其差异有统计学意义(p<0.05)，另外各组不同时间白细胞变化差异无统计学意义(p>0.05)，其说明二者联合无增加对机体在肝功能、白细胞的副面影响。
另外本实验中发现术中应用亚甲蓝引导肝动脉置管与造影引导有同样的作用，初步说明在一些开放或腹腔镜探查术后直视下置管具有一定的临床意义，避免了术中造影所需的物力、人力，也避免了放射线造影对患者及工作人员的影响。
综上所述，碘化油乳化As2O3经肝动脉栓塞治疗实验兔肝种植瘤灶是安全有效的。但是，治疗后肿瘤灶周围仍有散在活肿瘤细胞是否只与实验单次治疗所引起不足有关，以及在临床中的应用等问题均有待后续实验进一步观察。
参考文献
[1] 徐洪雨，高媛媛，武俏丽，等.三氧化二砷抑制人肝癌细胞株增殖和诱导凋亡作用[J].世界华人消化杂志，2008，8(11)：1233～1237.
[2] HinoT，KawashimaY，ShimabayashiS. Basicstudyf- orstabilizationofw/o/wemulsionanditsapplicationtotranscatheterarterialemboli-zationtherapy[J].AdvDrugDelivRev，2000，45(1)，27～45.
[3] 施海斌，李麟荪，谈恒山.碘油抗癌药化疗栓塞剂的理化特性研究[J].中华放射学杂志，1994，28(8)：510～512.
[4] 柳曦，李欣，赵俊功，等.兔VX2肝癌模型制作及综合影像评价[J].实用放射学杂志，2002，18(2)：132～134。
[5] 吴文娟，邹英华，南月敏，等.As2O3碘油栓塞对兔VX2肝癌凋亡、增殖及肝功能的影响，实用放射学杂志。2006，22(1)：1～4。
[6] 章芳，曾晓波，苏先狮，等.血清前白蛋白在各类乙肝检测中的意义[J].临床肝胆病学杂志，2001，17(3)：163～164.(陆光生 胡那宏 陈小伍 剧永乐 伍锦浩 朱达坚 张才铭 戎祯)