RP-HPLC法测定人血浆中的替硝唑
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【摘要】 目的 建立人血浆中替硝唑的检测方法。方法 采用RP-HPLC法测定人血浆中药物浓度，色谱柱为Lichrospher C18 (4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(32∶68 v/v)。结果 在0.1～80 mg•L-1范围内替硝唑峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9996), 最低可定量浓度为0.03 mg•L-1，绝对回收率为83.2~89.8%，准确度为93.1%~104.2%，日内、日间RSD小于10%。结论 本测定方法灵敏、准确、简便，适合于替硝唑的临床药物检测和药代动力学研究。
关键词： 替硝唑 血浆 RP-HPLC
Determination of tinidazole in humans plasma by RP-HPLC
Shen Guo-ping，Zhu derui，Long qifu，Li yaodong
(Dept. of Biochemistry,Qinghai University Medical College, Xining 810001)
Abstract AIM: To develop a simple,sensitive and rapid method for the determination of tinidazole in human plasma. METHOD: The plasma concentration of tinidazole was determined by RP-HPLC method ,the analysis involved a 250 mm × 4.6mm column packed with C18(5 um),the mobile phase consisted of methyl alcohol-water(32:68) RESULT: A good linearity was obtained in the range of 0.1～80 mg•L-1(r=0.9996),the recovery was between 83.2~89.8%, the accuracy was between 93.1%~104.2% the relative stand deviations of within-day and between day were less than 10%,the minimal detectable concentration in human plasma was 0.03 mg•L-1. CONCLUSION: The result demonstrated that the method was sensitive,accurate and simple for the determination of tinidazole in human plasma,it was suitable for the pharmacokinetics study of tinidazole.
Key words tinidazole; plasma; RP-HPLC
中图分类号：R97 文献标识码：B 文章编号：1004-7484(2011)06-0009-03
替硝唑(Tinidazole)为甲硝唑同系物，是一种新的硝基咪唑类药物，具有抗厌氧菌和抗原虫的作用，临床上主要用于治疗泌尿生殖道毛虫病及敏感厌氧菌所致的感染。与其同系物甲硝唑相比, 具有疗效好，半衰期长，疗程短，体内分布广，耐受性好等特点，但在全身用药后，仍有恶心、呕吐、厌食、腹痛等较为严重的不良反应[1-2]。本文建立了人血浆中替硝唑的反相高效液相色谱测定法，为替硝唑的临床药物检测和药代动力学研究提供一定的参考依据。
1 试药与仪器
1.1 药品与试剂
替硝唑对照品由中国药品生物制品鉴定所提供，甲醇和乙腈为色谱纯(山东禹王公司)，自制纯化水。
1.2 仪器
高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT泵，岛津SPD-10A 紫外检测器，N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)，TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂)，XW-80A旋涡混合器(上海精科有限公司)。
2 方法
2.1色谱条件
色谱柱：Lichrospher C18 (4.6×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水(32∶68 v/v)，流速1 ml•min-1，检测波长310 nm，进样量为20 μl。
2.2对照品溶液配制
精密称取替硝唑对照品10 mg置10 ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1 mg.ml-1替硝唑的储备液。以此标准储备液稀释配制成各种浓度的对照品溶液。
2.3 样品处理
取人血浆样品0.5 ml于离心管中,加入0.5 ml乙腈，涡漩1 min，16000 rpm离心10 min,取上清液20 ul，用HPLC法进行测定。在本实验条件下，替硝唑的保留时间约为5.0 min，此峰与杂质分离良好，色谱图见图1。
(Ⅰ) (Ⅱ) (Ⅲ)
Fig 1. HPLC chromatograms of human plasma(1: tinidazole)
(Ⅰ)blank plasma (Ⅱ)blank plasma spiked with tinidazole
(Ⅲ) plasma after oral administration of tinidazole
2.4 标准曲线制备及最低检测浓度测定
取离心管数支，分别加入空白血浆0.5 ml与替硝唑对照品溶液适量，配成浓度为0.1，0.5，1，5，10，25，50，80 mg•L-1的标准血浆样品，涡漩混匀后按“样品处理”项下操作，每种浓度做5份，记录峰面积。以替硝唑峰面积A对浓度C进行回归计算 ......
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