时间分辨免疫荧光法检测乙肝病毒抗原抗体与HBV-DNA定量的关系
【摘要 】 目的 探讨时间分辨免疫荧光技术检测乙肝抗原抗体五项指标和HBV-DNA之间的关系。方法 将210例血清标本同时对乙肝病毒抗原抗体五项指标定量和HBV-DNA含量分别进行检测, 按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后,进行乙肝病毒标志物与HBV-DNA的分析研究。结果 乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性(大三阳)组HBV-DNA 检出率为96.9%,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性(小三阳)组检出率65.2%,HBcAb阳性组检出率47.1%,HBsAb阳性组检出率0%,五项全阴性组检出率0%。
关键词 ：乙肝病毒 时间分辨免疫荧光技术 实时荧光检测法
中图分类号：R115 文献标识码：B 文章编号：1004-7484(2012)01-0128-02
时间分辨免疫荧光检测与HBV-DNA关系密切,两者联用能更好的满足临床需求。时间分辨免疫荧光分析出现以前大多都是ELISA方法检测血清学标志物来判断,由于本身方法学的限制,ELISA 方法只能提供阴阳性判断,并不能提供乙肝病毒标志物的具体含量。另外,ELISA方法的灵敏度也受到方法学上的限制。时间分辨免疫定量检测乙肝血清学标志物不仅能提供每个项目检测的具体含量,更重要的是该方法学本身具有极高的灵敏度.实时荧光法检测HBV-DNA，能直接反映乙肝病毒存在与否，是否在复制，是否具有传染性。[1]所以，研究时间分辨检测乙肝五项与HBV-DNA 检测之间的内在联系,更直接、全面的了解HBV 在人体内的活动方式,便于更好的服务于临床，做好预防控制工作。
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1 材料与方法
1.1 标本
本院门诊、住院传染科肝炎病人血清标本210份，患者均是2010年1月至2011年9月我院门诊、住院的肝病患者，均符合1995年(北京)全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。男性156例，女性54例。同时分离进行乙肝病毒抗原抗体定量检测、外送上海艾迪康医学检验中心实时荧光法法检测HBV-DNA。
1.2 乙肝病毒抗原抗体的定量检测
上海新波公司ANYTEST2000全自动时间分辨荧光免疫分析仪，以及新波HBsAg、 HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 时间分辨免疫荧光定量诊断试剂盒。
1.3 HBV-DNA 的定量检测
上海艾迪康医学检验中心实时荧光法检测
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1.4 统计方法
将210份样本按照乙肝五项时间分辨免疫检测的结果分为5组,每一组与相应的HBV-DNA 的定量检测结果进行比较分析。
2 结果
乙肝抗原抗体五项时间分辨免疫检测与HBV-DNA 定量检测结果的比较。分析见表1所示。
表1 乙肝病毒抗原抗体检测与HBV-DNA检测关系分析
组别人数HBV-DNA阳性数检出率(%)HBV-DNA测定值(IU/mL)
大三阳656396.91.5*105—2.5*108
小三阳895865.25.0*102—5.0*106
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HbcAb(+)17847.11.0*102—2.0*104
HbsAb(+)2000〈1.000*103
五项全阴性1900〈1.000*103
3 讨论
乙型肝炎和乙肝病毒携带者在我国广泛流行，人群感染绿非常高，是危害人民健康的最严重传染病之一，影响人民的生活质量。研究乙肝病毒的传染性，危害性，更好地做好预防控制工作，促进人民身体健康，提高生活质量.
时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度，本院用的是上海新波公司提供的以稀土元素铕(Eu)为发光标记物的方法。定量检测乙肝病毒标志物.是诊断HBV感染的精确方法,是反映机体在病毒入侵后机体所作出的反应,以及反应的程度和反应的结果，非常适合于乙肝五项的检测分析.HBV-DNA 测定能反映患者感染的状态、是否具有传染性和传染性的强弱。由于HBV 是DNA 病毒, 因此HBV-DNA 的检测是衡量乙肝传染性的最精确的指标,HBV-DNA 阳性即反映有完整的病毒颗粒的复制,是判断患者具有传染性的直接证据。理解乙肝病毒抗原抗体检测与HBV-DNA 检测之间的复杂关系对于临床判断与治疗具有重大的指导意义。
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由实验结果表1 可以看出,大三阳65例HBV-DNA阳性63例,检出率为96.9%,而且HBV-DNA值也比较高,即这些患者体内DNA病毒具有较高的复制水平,是具有传染性的重要标志。表明传统上认为大三阳患者具有较高的传染性的说法较为合理的,小三阳89例HBV-DNA阳性58例, 检出率为65.2%。小三阳的HBV-DNA检出率大大低与大三阳，而且数值也较大三阳数值低.但是小三阳病人仍然具有较强的传染性.不论是大三阳或是小三阳,HBsAg阳性情况下,都存在一部分样本中HBV-DNA检测阴性，说明此类患者仍是处于H B V 感染期 。HBcAb阳性是既往感染的指标,处于恢复期,此时HBsAg 检测不出,却仍有近半数HBV-DNA 检测为阳性,但测定值较低,出现这种情况的原因一部分观点认为是病毒变异导致低水平复制或是HBsAg 的抗原决定簇发生变化导致检测不出HBsAg,尽管如此,大部分学者仍然认为并不是病毒变异,只是慢性携带者,因为如果是病毒变异, 通常血清中的HBV-DNA 的含量水平仍会较高。HbsAb是HBV感染后的中和抗体，具有一定的保护性，证明机体已有一定的抵抗力，表1中20例HbsAb阳性标本，HBV-DNA全部阴性，证明了这一点.五项全阴的样本19例也没有检测出HBV-DNA 阳性,说明没有受过乙肝病毒感染，或者HbsAg已经清除，病毒没有复制，不具传染性.[2]综上所述,时间分辨免疫荧光检测乙肝抗原抗体与HBV-DNA 检测的结果之间具有密切的内在联系,单独用其中一种方法的检测就来判断乙肝病毒感染、传染性及病毒是否在体内复制，总是存在一些缺陷。两种方法同时检测，互补结合,方能更准确、全面的反映患者体内HBV 的病毒感染情况，活动情况,为制定合理，准确的预防，治疗措施，提供精确可靠的指标.当然，在应用分析时，还要密切联系临床症状，肝功能生化指标等其他检测综合分析.时间分辨免疫荧光法是近年来推出的较精确，灵敏的免疫学诊断方法，结合HBV-DNA实时荧光检测，更好地研究病毒在体内的活动程度，发展变化，两者紧密联系，缺一不可.
参考文献
[1] 罗开忠，等. 时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物[J].中华肝脏病杂志，2003，9(11)：9
[2] 金莞尔.不同人群乙肝病毒感染状况分析[J].中国卫生检验杂志，2004，14(3)：316, 百拇医药(高丽华)
关键词 ：乙肝病毒 时间分辨免疫荧光技术 实时荧光检测法
中图分类号：R115 文献标识码：B 文章编号：1004-7484(2012)01-0128-02
时间分辨免疫荧光检测与HBV-DNA关系密切,两者联用能更好的满足临床需求。时间分辨免疫荧光分析出现以前大多都是ELISA方法检测血清学标志物来判断,由于本身方法学的限制,ELISA 方法只能提供阴阳性判断,并不能提供乙肝病毒标志物的具体含量。另外,ELISA方法的灵敏度也受到方法学上的限制。时间分辨免疫定量检测乙肝血清学标志物不仅能提供每个项目检测的具体含量,更重要的是该方法学本身具有极高的灵敏度.实时荧光法检测HBV-DNA，能直接反映乙肝病毒存在与否，是否在复制，是否具有传染性。[1]所以，研究时间分辨检测乙肝五项与HBV-DNA 检测之间的内在联系,更直接、全面的了解HBV 在人体内的活动方式,便于更好的服务于临床，做好预防控制工作。
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1 材料与方法
1.1 标本
本院门诊、住院传染科肝炎病人血清标本210份，患者均是2010年1月至2011年9月我院门诊、住院的肝病患者，均符合1995年(北京)全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。男性156例，女性54例。同时分离进行乙肝病毒抗原抗体定量检测、外送上海艾迪康医学检验中心实时荧光法法检测HBV-DNA。
1.2 乙肝病毒抗原抗体的定量检测
上海新波公司ANYTEST2000全自动时间分辨荧光免疫分析仪，以及新波HBsAg、 HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 时间分辨免疫荧光定量诊断试剂盒。
1.3 HBV-DNA 的定量检测
上海艾迪康医学检验中心实时荧光法检测
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1.4 统计方法
将210份样本按照乙肝五项时间分辨免疫检测的结果分为5组,每一组与相应的HBV-DNA 的定量检测结果进行比较分析。
2 结果
乙肝抗原抗体五项时间分辨免疫检测与HBV-DNA 定量检测结果的比较。分析见表1所示。
表1 乙肝病毒抗原抗体检测与HBV-DNA检测关系分析
组别人数HBV-DNA阳性数检出率(%)HBV-DNA测定值(IU/mL)
大三阳656396.91.5*105—2.5*108
小三阳895865.25.0*102—5.0*106
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HbcAb(+)17847.11.0*102—2.0*104
HbsAb(+)2000〈1.000*103
五项全阴性1900〈1.000*103
3 讨论
乙型肝炎和乙肝病毒携带者在我国广泛流行，人群感染绿非常高，是危害人民健康的最严重传染病之一，影响人民的生活质量。研究乙肝病毒的传染性，危害性，更好地做好预防控制工作，促进人民身体健康，提高生活质量.
时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度，本院用的是上海新波公司提供的以稀土元素铕(Eu)为发光标记物的方法。定量检测乙肝病毒标志物.是诊断HBV感染的精确方法,是反映机体在病毒入侵后机体所作出的反应,以及反应的程度和反应的结果，非常适合于乙肝五项的检测分析.HBV-DNA 测定能反映患者感染的状态、是否具有传染性和传染性的强弱。由于HBV 是DNA 病毒, 因此HBV-DNA 的检测是衡量乙肝传染性的最精确的指标,HBV-DNA 阳性即反映有完整的病毒颗粒的复制,是判断患者具有传染性的直接证据。理解乙肝病毒抗原抗体检测与HBV-DNA 检测之间的复杂关系对于临床判断与治疗具有重大的指导意义。
, 百拇医药
由实验结果表1 可以看出,大三阳65例HBV-DNA阳性63例,检出率为96.9%,而且HBV-DNA值也比较高,即这些患者体内DNA病毒具有较高的复制水平,是具有传染性的重要标志。表明传统上认为大三阳患者具有较高的传染性的说法较为合理的,小三阳89例HBV-DNA阳性58例, 检出率为65.2%。小三阳的HBV-DNA检出率大大低与大三阳，而且数值也较大三阳数值低.但是小三阳病人仍然具有较强的传染性.不论是大三阳或是小三阳,HBsAg阳性情况下,都存在一部分样本中HBV-DNA检测阴性，说明此类患者仍是处于H B V 感染期 。HBcAb阳性是既往感染的指标,处于恢复期,此时HBsAg 检测不出,却仍有近半数HBV-DNA 检测为阳性,但测定值较低,出现这种情况的原因一部分观点认为是病毒变异导致低水平复制或是HBsAg 的抗原决定簇发生变化导致检测不出HBsAg,尽管如此,大部分学者仍然认为并不是病毒变异,只是慢性携带者,因为如果是病毒变异, 通常血清中的HBV-DNA 的含量水平仍会较高。HbsAb是HBV感染后的中和抗体，具有一定的保护性，证明机体已有一定的抵抗力，表1中20例HbsAb阳性标本，HBV-DNA全部阴性，证明了这一点.五项全阴的样本19例也没有检测出HBV-DNA 阳性,说明没有受过乙肝病毒感染，或者HbsAg已经清除，病毒没有复制，不具传染性.[2]综上所述,时间分辨免疫荧光检测乙肝抗原抗体与HBV-DNA 检测的结果之间具有密切的内在联系,单独用其中一种方法的检测就来判断乙肝病毒感染、传染性及病毒是否在体内复制，总是存在一些缺陷。两种方法同时检测，互补结合,方能更准确、全面的反映患者体内HBV 的病毒感染情况，活动情况,为制定合理，准确的预防，治疗措施，提供精确可靠的指标.当然，在应用分析时，还要密切联系临床症状，肝功能生化指标等其他检测综合分析.时间分辨免疫荧光法是近年来推出的较精确，灵敏的免疫学诊断方法，结合HBV-DNA实时荧光检测，更好地研究病毒在体内的活动程度，发展变化，两者紧密联系，缺一不可.
参考文献
[1] 罗开忠，等. 时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物[J].中华肝脏病杂志，2003，9(11)：9
[2] 金莞尔.不同人群乙肝病毒感染状况分析[J].中国卫生检验杂志，2004，14(3)：316, 百拇医药(高丽华)