VEGFR—3的表达与乳腺癌浸润和转移关系的研究(2)
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1.2.3.310%缓冲中性甲醛固定液(500ml)440ml蒸馏水中加入Na2HPO4·12H2O 6.5g，NaH2PO4·2H2O 2.0g，40%甲醛60ml。
1.3研究方法
1.3.1组织切片的制备及染色
1.3.1.1组织切片制备步骤如下①乳腺组织标本固定、脱水、透明、浸蜡和包埋：固定、脱水、透明、浸蜡于自动脱水机进行。10%甲醛溶液固定8h，85%乙醇1h，90%乙醇1h，95%乙醇Ⅰ1h，95%乙醇Ⅱ1h，100%乙醇Ⅰ1h，100%乙醇Ⅱ1h，二甲苯Ⅰ20min，二甲苯Ⅱ20min，浸蜡Ⅰ2h，浸蜡Ⅱ2h，然后进行手工石蜡包埋。②切片、摊片、烤片：制成3um厚切片，冰水中贴片，再于45度摊片水浴槽中摊片，再于63度烤片箱中倾斜45度放置，烤片4h。③脱蜡至水：从烤片箱中取出，即放入二甲苯Ⅰ1h，二甲苯Ⅱ1h，分别于100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇及70%乙醇各3min。
1.3.1.2HE染色苏木精染色5min，自来水冲洗掉多余的染液，1%盐酸酒精分化组织1min，自来水充分洗涤后细胞核呈紫蓝色。然后，再用1%伊红染色3min，自来水冲洗，85%乙醇20s，90%乙醇40s，95%乙醇Ⅰ1min，95%乙醇Ⅱ1min，100%乙醇Ⅰ2min，100%乙醇Ⅱ2min，二甲苯Ⅰ和Ⅱ各透明2min，用中性树胶封片保存。
1.3.2免疫组织化学检测
1.3.2.1标本处理常规乳腺组织10%多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，3um厚度切片。温控仪电热恒温干燥箱内58℃烤片1h。常规石蜡切片脱蜡至水。
1.3.2.2方法即用型二步法(PV-6000)VEGFR-3表达的免疫组织化学检测。
1.3.2.3染色步骤一抗为兔抗人血管内皮生长因子受体3多克隆抗体(1：100) ......
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