地龙活络胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响
【摘 要】目的：观察地龙活络胶囊对小鼠凝血时间及出血时间的影响，对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响。方法：采用寒冷刺激加肾上腺素造成血瘀模型等方法，观察地龙活络胶囊的药理作用。结果：①地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常组比较，有延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0.05或P<0.01)；②模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；地龙活络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)；③地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常组比较，能延长小鼠存活率(P<0.05或P<0.01)。结论：地龙活络胶囊能明显延长小鼠凝血时间、显著降低血瘀大鼠的血小板聚集作用。
【关键词】血瘀证/药理学；地龙活络胶囊；小鼠；大鼠；凝血因子
【中图分类号】R 915 【文献标识码】A 【文章编号】1004- 7484(2012)04- 0028- 01
1 实验材料
1.1 药品 地龙活络胶囊药粉，由我院中心制剂室提供，批号：20091107。临用前用蒸馏水配成不同浓度备用。
1.2 阳性对照药 消栓通络片，批号：20080601。
1.3 试剂 戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号WS20080401；胶原蛋白，Sig ma，批号：9879；盐酸肾上腺素.批号：0809301；冰醋酸，批号：08083l；氢氧化钠，批号：2008228；活化部分凝血活酶(APTT)时间测定试剂盒，北京世堂帝科学仪器公司，批号：STG2020l-27；凝血活酶原(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：STGl010l-27；凝血酶(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号STG20802-19；血小板诱导剂(ADP)，北京世帝科学仪器公司。
1.4 仪器 德国Sa rtorius电子天平(感量0.1mg)；TDZ5 -WS多管架自动平衡离心机，湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司；钻石牌秒表(上海秒表厂)；德国Axioskop40蔡司显微镜；血小板聚集/凝血因子分析仪(北京中勤世帝有限公司)；CBV- 1 500A高性能无菌实验台，上海瑞仰净化装箭有限公司；日立KY2000型半自动生化分析仪。
1.5 动物 二级昆明种小鼠，雄雌各半，体重1 8～22g；SD大鼠，雌雄各半，体重250～350g，均由第四军医大学实验动物研究中心提供，生产合格征号：scxk(军)宁第2002-005号。
2 方法和结果
2.1 地龙活络胶囊对凝血功能的影响 60只小鼠随机分为正常、阳性、消栓通0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，每组l 2只,每天给药1次，连续给药14d，于末次给药后lh，将小鼠尾尖1 cm处用利剪剪断，它即秒表开始计时，至血液凝固为止即为出血时间[1]。血液自动流出.用滤纸吸去第1滴血后，将血滴于清洁载玻片两端各1滴，立即秒表开始计时，用 6号干燥针头沿血滴边缘向里轻轻挑动血滴，至针头能挑起纤维蛋白丝为止.即为凝血时间。
结果(见表1)显示地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0.05或P<0.01)。
表1 地龙活络胶囊小鼠凝血时间的影响(x±s n=12)
2.2 地龙活络胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、地龙活络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg六个剂量组，除正常对照组外，各组均造成血瘀模型。造模：参照文献[2]复制血瘀模型，但盐酸肾上腺素(Adr)的剂量及冰冻时间有所改变，具体操作如下：将1mg/mL的Adr用生理盐水稀释1倍，第1d每隔4h皮下注射0.2mL稀释后的Adr，共给3次。在每2次给药的中间时间将大鼠放入0～2℃冰水中4min进行冷刺激；第2d仍按的日剂量给予2次Adr (间隔4h)，在2次给药的中间时间将大鼠放入冰水中3min进行1次冷刺激，模型即造成。48h后大鼠1%戊巴比妥钠(40mg/kg)行腹腔麻醉，腹腔静脉取血，置于3.8枸橼酸钠抗凝管中。离心，测定血小板聚集率和凝血因子[3]。
结果(见表2～3)与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；地龙活络胶囊 0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态,与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)。
表2 地龙活络胶囊血瘀大鼠的血小板聚集率的影响(x±s n=10)
表3 地龙活络胶囊血瘀大鼠凝血因子的影响(x±s n=10)
3 讨论
近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，严重危害人类的健康。血小板的粘附、聚集、释放反应可导致血栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病[4]。因此活血化瘀、通经活络是其主要的治疗原则。地龙活络胶囊由地龙、僵蚕、天南星(制)、水蛭等组成，具有活血化瘀，温经通络，祛风定惊，散结止痛的功效，用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言语迟涩、发音不清、口眼歪斜、肢体麻木，半身不遂及动脉硬化症。临床上取得了良好的疗效。对大鼠造成血瘀模型，发现与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；地龙活络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异(P<0. 05或P<0.01)。凝血时间实验结果显示，地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0. 05或P<0.01)。胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成结果，表明地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率(P<0. 05或P<0.01)。表明地龙活络胶囊可以在活体中显示出抗血栓作用，本实验为地龙活络胶囊的临床疗效提供了药理学依据。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局中药新药研究指南(药学药理学毒理学)：[M].1994：172
[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：564- 566
[3] 张强宗，刘俊田，史小莲，等.水蛭免加热提取物对高凝动物模型凝血系统及血小板聚集率的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006。1 2(5)：47- 49.
[4] 陈领朝，连秀峰.袁秉祥，等.脑络舒通胶囊对大鼠实验性脑及动静脉血栓形成的药效与研究[J].陕西中医.2002，23(4)376- 377., 百拇医药(张峰)
【关键词】血瘀证/药理学；地龙活络胶囊；小鼠；大鼠；凝血因子
【中图分类号】R 915 【文献标识码】A 【文章编号】1004- 7484(2012)04- 0028- 01
1 实验材料
1.1 药品 地龙活络胶囊药粉，由我院中心制剂室提供，批号：20091107。临用前用蒸馏水配成不同浓度备用。
1.2 阳性对照药 消栓通络片，批号：20080601。
1.3 试剂 戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号WS20080401；胶原蛋白，Sig ma，批号：9879；盐酸肾上腺素.批号：0809301；冰醋酸，批号：08083l；氢氧化钠，批号：2008228；活化部分凝血活酶(APTT)时间测定试剂盒，北京世堂帝科学仪器公司，批号：STG2020l-27；凝血活酶原(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：STGl010l-27；凝血酶(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号STG20802-19；血小板诱导剂(ADP)，北京世帝科学仪器公司。
1.4 仪器 德国Sa rtorius电子天平(感量0.1mg)；TDZ5 -WS多管架自动平衡离心机，湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司；钻石牌秒表(上海秒表厂)；德国Axioskop40蔡司显微镜；血小板聚集/凝血因子分析仪(北京中勤世帝有限公司)；CBV- 1 500A高性能无菌实验台，上海瑞仰净化装箭有限公司；日立KY2000型半自动生化分析仪。
1.5 动物 二级昆明种小鼠，雄雌各半，体重1 8～22g；SD大鼠，雌雄各半，体重250～350g，均由第四军医大学实验动物研究中心提供，生产合格征号：scxk(军)宁第2002-005号。
2 方法和结果
2.1 地龙活络胶囊对凝血功能的影响 60只小鼠随机分为正常、阳性、消栓通0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，每组l 2只,每天给药1次，连续给药14d，于末次给药后lh，将小鼠尾尖1 cm处用利剪剪断，它即秒表开始计时，至血液凝固为止即为出血时间[1]。血液自动流出.用滤纸吸去第1滴血后，将血滴于清洁载玻片两端各1滴，立即秒表开始计时，用 6号干燥针头沿血滴边缘向里轻轻挑动血滴，至针头能挑起纤维蛋白丝为止.即为凝血时间。
结果(见表1)显示地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0.05或P<0.01)。
表1 地龙活络胶囊小鼠凝血时间的影响(x±s n=12)
2.2 地龙活络胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、地龙活络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg六个剂量组，除正常对照组外，各组均造成血瘀模型。造模：参照文献[2]复制血瘀模型，但盐酸肾上腺素(Adr)的剂量及冰冻时间有所改变，具体操作如下：将1mg/mL的Adr用生理盐水稀释1倍，第1d每隔4h皮下注射0.2mL稀释后的Adr，共给3次。在每2次给药的中间时间将大鼠放入0～2℃冰水中4min进行冷刺激；第2d仍按的日剂量给予2次Adr (间隔4h)，在2次给药的中间时间将大鼠放入冰水中3min进行1次冷刺激，模型即造成。48h后大鼠1%戊巴比妥钠(40mg/kg)行腹腔麻醉，腹腔静脉取血，置于3.8枸橼酸钠抗凝管中。离心，测定血小板聚集率和凝血因子[3]。
结果(见表2～3)与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；地龙活络胶囊 0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态,与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)。
表2 地龙活络胶囊血瘀大鼠的血小板聚集率的影响(x±s n=10)
表3 地龙活络胶囊血瘀大鼠凝血因子的影响(x±s n=10)
3 讨论
近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，严重危害人类的健康。血小板的粘附、聚集、释放反应可导致血栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病[4]。因此活血化瘀、通经活络是其主要的治疗原则。地龙活络胶囊由地龙、僵蚕、天南星(制)、水蛭等组成，具有活血化瘀，温经通络，祛风定惊，散结止痛的功效，用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言语迟涩、发音不清、口眼歪斜、肢体麻木，半身不遂及动脉硬化症。临床上取得了良好的疗效。对大鼠造成血瘀模型，发现与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；地龙活络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异(P<0. 05或P<0.01)。凝血时间实验结果显示，地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0. 05或P<0.01)。胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成结果，表明地龙活络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率(P<0. 05或P<0.01)。表明地龙活络胶囊可以在活体中显示出抗血栓作用，本实验为地龙活络胶囊的临床疗效提供了药理学依据。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局中药新药研究指南(药学药理学毒理学)：[M].1994：172
[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：564- 566
[3] 张强宗，刘俊田，史小莲，等.水蛭免加热提取物对高凝动物模型凝血系统及血小板聚集率的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006。1 2(5)：47- 49.
[4] 陈领朝，连秀峰.袁秉祥，等.脑络舒通胶囊对大鼠实验性脑及动静脉血栓形成的药效与研究[J].陕西中医.2002，23(4)376- 377., 百拇医药(张峰)
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 动物类 > 地龙