山豆根配方颗粒中苦参碱含量测定
【摘要】目的：建立山豆根配方颗粒中苦参碱的含量方法。方法：采用HPLC法，色谱柱：Phenomenex kinetex HILIC(2.6μm 100×4.6mm)，流动相：乙腈:10mM乙酸铵(90:10)，pH=4.1，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为215nm。结果：苦参碱线性范围为53.6～536μg?ml-1(r＝0.9997)，平均加样回收率为99.16%，RSD为1.96%。结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于山豆根配方颗粒的质量控制。
【中图分类号】R283.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)10-0035-02
山豆根配方颗粒是以山豆根药材为原料经现代工艺提取、浓缩、精制而的单味产品，其性味、归经、功效与原饮片保持基本一致，保留了中医辨证施治的特色，而且携带、服用方便。目前采用HPLC法测定原药材中苦参碱含量多多选择氨基柱、苯基柱、C18柱进行试验[1-3]，本实验选择亲水柱HILIC柱，建立了HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱含量测定方法。
, 百拇医药
1仪器及材料
1.1仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，FA2004电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)，KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2材料：山豆根配方颗粒(广西培力(南宁)药业有限公司，批号：A061024-01、 A081082-01、A090706-01)，苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110805-200508)，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件：Phenomenex kinetex HILIC(2.6μm 100×4.6mm)色谱柱，流动相为乙腈:10mM乙酸铵(90:10)，pH=4.1，使用用前以微孔滤膜滤过并经超声脱气处理，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为215nm。进样量10μl。理论塔板数不低于3000。
, 百拇医药
2.2对照品溶液制备：精密称取苦参碱13.4mg，加甲醇定容至25.00mL容量瓶中，配制成苦参碱浓度536μg?ml-1。
2.3供试品溶液制备：取山豆根配方颗粒0.5g，研成粉末，精密称量，置具塞锥
中，精密加入氯仿-甲醇(10:10)20mL，氨液1.5mL，密塞，称量，于70℃水浴回
形瓶流加热4h后补重，摇匀，滤过，取续滤液转移，精密量取续滤液10mL，挥干溶剂，加甲醇溶解稀释，转移于10mL容量瓶中至刻度，摇匀，进样前用0.45μm滤膜滤过，即得。
2.4标准曲线的制备：精密吸取2.2项下对照品溶液0.50mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL定容至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，进样制备。以浓度C为横坐标，峰面积Y为纵坐标，将所得数据绘制成标准曲线，得到苦参碱的线性方程为：Y＝16.007C-48.713，r＝0.9997，线性范围为53.6～536μg?ml-1。
, http://www.100md.com
2.5精密度试验：按上述色谱条件用苦参碱对照品进样10μl，重复进样6次，测定苦参碱的峰面积。平均值为3433.2，RSD值为0.88%。数据见表2。
2.6稳定性试验：取一供试品溶液(批号：A101276-01 )，按上述色谱条件在0h、2h、4h、8h、16h、24h测定峰面积值，在24h苦参碱平均含量11.01mg/g，RSD值为1.48%，表明供试样溶在24h稳定。
2.7重复性实验：取上述样品按照供试品溶液的制备法制备6份样品液，按色谱条件测定样品中所含苦参碱含量。平均值为11.02mg/g，RSD值为1.54%。
2.8加样回收率试验：称取已知含量的样品6份， 按照供试品溶液制备方法进行操作，取1mL，精密加入苦参碱对照品1mL，摇匀，按上述色谱条件，结果平均回收率99.16%，RSD为1.98%。
, 百拇医药 2.9样品测定：按上述方法测定了四批山豆根配方颗粒样品，以及阴性样品，按照外标法以峰面积计算苦参碱的含量。
3讨论
3.1实验中采用回流法与超声提取法考察样品提取效果，结果显示，回流法较超声法提取完全，且苦参碱测得含量较高。
3.2 色谱条件考察中曾选择反相柱以甲醇-0.1%磷酸(5:95)为流动相，出峰时间靠前，分离效果不好，采用亲水色谱柱分离山豆根制剂中苦参碱，分离效果较好，流动相的pH、离子强度对HILIC亲水柱分离度效果影响较大。
3.3 本实验首次采用HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱的含量，测定结果也较为满意，且本方法灵敏、准确，重现性好,为其质量控制提供了实验依据。
参考文献：
, 百拇医药
[1] 马长华,曹天海.HPLC法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].药物分析杂志,2000,20 (6):408-410.
[2] 邓富良,陈 本,梁绍先,等.HPLC测定山豆根中苦参碱的含量[J].中成药,2001,23(9): 670-672.
[3] 宋金春,张 立,杨 芰.高效液相色谱法测定复方山豆根注射液中苦参碱的含量[J].贵阳中医学院学报,2001,26(1):56-57.
基金项目：
广西中医药大学赛恩斯新药学院科研项目(编号:20110201)
通讯作者：
江海燕(1958～)，女，教授，主要从事中药质量控制与管理研究, http://www.100md.com(谢丽莎 闫守霞 金钊 江海燕)
【中图分类号】R283.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)10-0035-02
山豆根配方颗粒是以山豆根药材为原料经现代工艺提取、浓缩、精制而的单味产品，其性味、归经、功效与原饮片保持基本一致，保留了中医辨证施治的特色，而且携带、服用方便。目前采用HPLC法测定原药材中苦参碱含量多多选择氨基柱、苯基柱、C18柱进行试验[1-3]，本实验选择亲水柱HILIC柱，建立了HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱含量测定方法。
, 百拇医药
1仪器及材料
1.1仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，FA2004电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)，KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2材料：山豆根配方颗粒(广西培力(南宁)药业有限公司，批号：A061024-01、 A081082-01、A090706-01)，苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110805-200508)，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件：Phenomenex kinetex HILIC(2.6μm 100×4.6mm)色谱柱，流动相为乙腈:10mM乙酸铵(90:10)，pH=4.1，使用用前以微孔滤膜滤过并经超声脱气处理，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为215nm。进样量10μl。理论塔板数不低于3000。
, 百拇医药
2.2对照品溶液制备：精密称取苦参碱13.4mg，加甲醇定容至25.00mL容量瓶中，配制成苦参碱浓度536μg?ml-1。
2.3供试品溶液制备：取山豆根配方颗粒0.5g，研成粉末，精密称量，置具塞锥
中，精密加入氯仿-甲醇(10:10)20mL，氨液1.5mL，密塞，称量，于70℃水浴回
形瓶流加热4h后补重，摇匀，滤过，取续滤液转移，精密量取续滤液10mL，挥干溶剂，加甲醇溶解稀释，转移于10mL容量瓶中至刻度，摇匀，进样前用0.45μm滤膜滤过，即得。
2.4标准曲线的制备：精密吸取2.2项下对照品溶液0.50mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL定容至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，进样制备。以浓度C为横坐标，峰面积Y为纵坐标，将所得数据绘制成标准曲线，得到苦参碱的线性方程为：Y＝16.007C-48.713，r＝0.9997，线性范围为53.6～536μg?ml-1。
, http://www.100md.com
2.5精密度试验：按上述色谱条件用苦参碱对照品进样10μl，重复进样6次，测定苦参碱的峰面积。平均值为3433.2，RSD值为0.88%。数据见表2。
2.6稳定性试验：取一供试品溶液(批号：A101276-01 )，按上述色谱条件在0h、2h、4h、8h、16h、24h测定峰面积值，在24h苦参碱平均含量11.01mg/g，RSD值为1.48%，表明供试样溶在24h稳定。
2.7重复性实验：取上述样品按照供试品溶液的制备法制备6份样品液，按色谱条件测定样品中所含苦参碱含量。平均值为11.02mg/g，RSD值为1.54%。
2.8加样回收率试验：称取已知含量的样品6份， 按照供试品溶液制备方法进行操作，取1mL，精密加入苦参碱对照品1mL，摇匀，按上述色谱条件，结果平均回收率99.16%，RSD为1.98%。
, 百拇医药 2.9样品测定：按上述方法测定了四批山豆根配方颗粒样品，以及阴性样品，按照外标法以峰面积计算苦参碱的含量。
3讨论
3.1实验中采用回流法与超声提取法考察样品提取效果，结果显示，回流法较超声法提取完全，且苦参碱测得含量较高。
3.2 色谱条件考察中曾选择反相柱以甲醇-0.1%磷酸(5:95)为流动相，出峰时间靠前，分离效果不好，采用亲水色谱柱分离山豆根制剂中苦参碱，分离效果较好，流动相的pH、离子强度对HILIC亲水柱分离度效果影响较大。
3.3 本实验首次采用HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱的含量，测定结果也较为满意，且本方法灵敏、准确，重现性好,为其质量控制提供了实验依据。
参考文献：
, 百拇医药
[1] 马长华,曹天海.HPLC法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].药物分析杂志,2000,20 (6):408-410.
[2] 邓富良,陈 本,梁绍先,等.HPLC测定山豆根中苦参碱的含量[J].中成药,2001,23(9): 670-672.
[3] 宋金春,张 立,杨 芰.高效液相色谱法测定复方山豆根注射液中苦参碱的含量[J].贵阳中医学院学报,2001,26(1):56-57.
基金项目：
广西中医药大学赛恩斯新药学院科研项目(编号:20110201)
通讯作者：
江海燕(1958～)，女，教授，主要从事中药质量控制与管理研究, http://www.100md.com(谢丽莎 闫守霞 金钊 江海燕)
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 根类 > 广豆根