小鼠骨骼肌卫星细胞分离与纯化的改良
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【摘 要】目的：建立一种快速高效的小鼠骨骼肌卫星细胞的提取、纯化的实验方法，为进一步研究肌损伤与修复再生机制建立离体损伤模型奠定基础。方法：两步酶消化法结合差速贴壁技术并对其改良，分离出骨骼肌卫星细胞，并进行免疫组化鉴定。结果：改良后提取、纯化所得到的肌卫星细胞纯度可达到90%，明显高于普通方法。结论：本实验通过改良骨骼肌卫星细胞培养方法，使肌卫星细胞纯度明显增高。
【关键词】肌卫星细胞；分离；纯化
Mauro等[1]1961年首次在蛙骨骼肌中发现，肌卫星细胞是一种源于胚胎中胚层的干细胞。在发育成熟的个体，呈小单核梭形分布于肌纤维浆膜和基底膜之间，在正常情况下处于静息状态。当肌肉受到损伤等刺激时，则可进入有丝分裂循环，形成肌肉修复所需的细胞[2～4]。新生细胞可以相互融合形成新肌束，或融入已有肌束，以修复肌组织损伤。正是由于卫星细胞的这些特性，使其成为肌肉组织工程、基因工程和胚胎发育研究的新热点[5～6]。但肌卫星细胞的分离与纯化也成了亟待解决的问题，普通方法分离时含有大量的杂质细胞，本实验旨在提高肌卫星细胞的纯度。
1 材料与方法
1.1 材料
4～6周龄清洁级C57 BL/6小鼠(15～17 bg)，雄性，由中国科学院上海实验动物中心提供。DF培养基、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(Trypsin)均购自美国Gibico BRL公司。小牛血清(FCS)购自Hyclone公司。
1.2 方法
1.2.1 准备
取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒30 min。开始操作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。5～7日龄C57BL/10小鼠2只，DMEM/F12培养基，10% FCS+5% FBS，PBS缓冲液，0.25%胰蛋白酶，0.1%Ⅰ型胶原酶。
1.2.2 处理组织 将小鼠断颈处理，碘伏浸泡后，75%酒精浸泡消毒5 min，用消毒剪刀剪开下肢皮肤，剪断后肢，分离出股四头肌 ......
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