OPG基因与小鼠腰椎间盘退变的关系研究(2)
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参见附件。
1 材料和方法
1.1 实验材料：
实验动物： 本研究所用实验动物为OPG基因敲除纯合子小鼠(OPG knock-out type mouse， OPG-/-)及野生型C57/BL(wild type mouse， WT)小鼠，实验动物均由上海南方模式生物科技发展有限公司培育。实验分组方法：将24只OPG-/-小鼠，按饲养终点随机分为4W、8W、12W组，每组8只，24只同龄的C57/BL小鼠也采用相同的分组方法作为正常对照。实验动物饲养于上海交通大学医学院新华医院实验动物中心清洁级动物室(室温控制于(23 ± 1) ℃， 湿度56， 12 h间隔照明， 定期紫外线消毒与通风)。
设备与试剂：奥林巴斯BX51显微图像分析系统(Olympus BX51 DP72； Japan)。一抗(鼠抗多克隆) Abbiotec
1.2 实验方法：
将每个观察终点的OPG-/-小鼠及对照组WT小鼠在相同条件下同时处死，在严格无菌条件下分离L4-5段腰椎，去除腰椎周围多余的软组织后，立即泡入4%多聚甲醛，置于4℃环境中固定24小时，流水冲洗后转入脱钙液处理，完成脱钙后流水冲洗，再转入75%酒精固定，作为组织学评价及免疫组化染色标本的标本。
1.2.1 椎间盘番红O-固绿染色：将椎间盘标本切片浸入苏木素染液2分钟左右，流水充分冲洗后用1%盐酸酒精分化20-30秒，流水充分冲洗，洗去残留染液；再用0.02%固绿水溶液染色2 min，1%冰醋酸冲洗切片，去除残留固绿后，用1%番红O染色2 min，再用95%乙醇浸洗，去除残留番红O，95%乙醇、无水乙醇梯度脱水 ......
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