小鼠LIGHT胞外段基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备(1)
 |
| 第1页 |
参见附件。
【摘 要】目的：PCR扩增小鼠LIGHT胞外段基因(LIGHTECD)，构建含LIGHTECD的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，并免疫新西兰兔，制备多克隆抗体。方法：提取小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中的总mRNA，RT-PCR技术扩增LIGHTECD，克隆至原核表达质粒pGEX-6P-2中，构建重组表达载体pGEX-6P-2-LIGHTECD。重组质粒进行PCR和基因测序鉴定后，转化大肠杆菌XL-1 Blue，IPTG诱导表达。融合蛋白纯化后纯化后免疫新西兰兔，ELISA 及Western- blot 分析兔血清中抗LIGHTECD抗体的效价和特异性。结果：RT-PCR扩增得到525 bp LIGHTECD目的片段；经PCR和测序鉴定，证明构建的重组质粒中插入的片段为LIGHTECD基因，测序结果经BLAST分析，与Genbank上登录序列完全一致；经IPTG诱导，重组质粒表达一相对分子量(Mr)约为45kD的目的蛋白条带。ELISA 检测免疫兔血清效价为1∶20 000。结论：成功地克隆了小鼠LIGHT胞外段基因，并表达了相应可溶性蛋白，准备了高效价的兔抗LIGHTECD多克隆抗体，为进一步研究其功能奠定了基础。
【关键词】LIGHT；原核表达；免疫原性；多克隆抗体
LIGHT (lymphotoxin-like inducible protein that competes with glycoprotein D for herpesvirus entry on T cells)最早是Mauri等[1]在对单纯疱疹病毒入侵活化T细胞的研究中发现的，是肿瘤坏死因子超家族的第14个成员，又名HVEM-L (Herpesvirus entry mdeiator-Ligand)或TNFSF14 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。