通用模板实时PCR法对YMDD突变的检测(1)
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【摘 要】目的：本研究旨在建立一种快速准确的方法，用于乙肝患者拉米夫定治疗过程中的耐药突变的检测与监控。方法：通过运用通用模板和Taqman探针，我们建立了一种用于检测YMDD突变的实时PCR的方法，通过I反应，V反应，和对照组的C反应，可以检测到YIDD，YVDD突变，以及HBV的总量。当ΔCt <3.5时，即可确认突变存在。含有乙肝病毒聚合酶基因YMDD变异株的质粒经过梯度稀释，并进行检测验证。本研究对163例接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清样本采用这种方法进行检测，结果与DNA测序法一致。 结果：检测范围可至103拷贝/ml，并且可以排除非特异性扩增。在163例样本中，有51例可以检测到耐药突变。 结论：这种通用模板实时PCR方法对于接受拉米夫定治疗乙肝患者的YMDD突变的定量是快速准确的，可以用于拉米夫定治疗前以及治疗过程中耐药突变的监控。
【关键词】HBV；YMDD；突变；UT-PCR
【文章编号】1004-7484(2014)05-2899-02
据估计，全世界约有3.5亿人感染慢性乙肝病毒，HBV是导致肝硬化，肝癌的主要原因，80%的肝癌由此引起。通过拉米夫定等抗病毒药物的运用，HBV已得到有效治疗。但是，长期单一治疗通常不能完全抑制病毒的复制，而会出现耐药突变，当YMDD突变为YIDD，YVDD时，就会发生拉米夫定耐药【1，2】。
耐药突变株的病毒聚合酶基因通过选择性扩增部分PCR片段后，扩增产物直接进行测序，可以被检测到。但是这种方法费用昂贵，操作繁琐，耗时间长，而且灵敏度低，通常只能检测20%的病毒量。其他的分子生物学技术，如RFLP技术 ......
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