PCR技术在肺外结核诊断中的应用
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【摘 要】目的：本研究的目的是探讨PCR技术联合常规方法在肺外结核疾病中的诊断效果。材料和方法：所有标本均采集于在临床上疑似肺外结核的病例。我们利用齐尼氏痰涂片检查(ZNS)，改良罗氏培养法(LJM)和PCR技术对匀浆标本进行检测。结果：总共有182例疑似为肺外结核的标本节接受了上述三种方法的检查。其中22例经至少一种方法检测证实为阳性。PCR技术检测出肺外结核病例最多，其次是细菌培养。结论：联合使用现有的检测技术可以提高实验室对存在于临床标本中的结核分枝杆菌的检出率。而PCR技术必须包含在肺外结核的诊断程序之中。
【关键词】肺外结核；PCR 金标准
【文章编号】1004-7484(2014)06-3508-02
结核病是一项重大的公共健康问题。每年，世界范围内新增确诊病例超过900万，而登记在册的死亡病例将近200万[1]。肺外结核占所有免疫功能不全并罹患结核的病人总数的1/5。在HIV阳性个体中，肺外结核发病率非常高，占全部结核病例的50%[2]。由于此病对于标准的抗结核菌疗法比较敏感，所以早期精确的诊断至关重要。分子生物学方法是诊断肺外结核较好的一个选择，PCR技术具有较高的敏感性，特异性和诊断速度[3]。
1 材料和方法：
收集承德医学院附属医院2008年至2013年对193例疑似肺外结核的临床标本的检测结果。193例标本均进行PCR检测，其中11标本由于量比较小，而未进行常规方法检测。对剩余182例标本进行PCR检测和常规方法检测的对照分析。
首先将这些收集的标本进行匀浆化处理。然后对匀浆化的标本进行齐尼氏痰涂片，改良罗氏法培养和PCR技术检测。使用QIAampDNA微型试剂盒对DNA进行提取。
我们利用两种PCR体外诊断试剂盒【Real-TM(Sacace)J检测试剂盒以IS6110为靶序列设计引物，Seeplex多重分子检测诊断试剂盒(Seegene)以IS6110和MPB64为靶序列设计引物】对标本进行检测。所有接受PCR检测的标本均进行齐尼氏痰涂片检查以及改良罗氏法的细菌培养。我们对培养物进行了为8周的观察。
统计学分析：我们利用Kappa检验确定本研究中不同的检测方法的结果是否一致 ......
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