论文下载：汉坦病毒Ｓ片段荧光定量ＰＣＲ参考标准品的构建

汉坦病毒Ｓ片段荧光定量ＰＣＲ参考标准品的构建(1)

http://www.100md.com 2006年9月1日周欣李燕婷沈荣明沈微娟瞿涤

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    摘要： [目的] 构建汉坦病毒S片段标准品，用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒。 [方法] 对S片段基因进行序列分析，利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针，提取病人总RNA，逆转录为cDNA，经PCR扩增，产物纯化后与PMD 18-T Vector连接，转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒，提取质粒并进行定量。 [结果] 重组S片段基因质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长，表明基因已成功克隆。以不同稀释水平的标准品进行扩增，统计学分析显示Ct 值与标准品浓度的对数存在良好线性关系，回归系数在0.99以上。成功制备并获得稳定的S片段重组质粒。 [结论] 该方法能大量制备质粒标准品，如何进行荧光RT-PCR条件的优化是关键所在。

    关键词：S片段；实时荧光定量PCR；标准品；中图分类号：R 372 文献标识码： A

    Construction of reference standard plasmids of real-time fluorescence quantitative PCR for detecting Hantavirus S segmentZHOU Xin1, LI Yan-ting2, SHEN Rong-ming2, SHEN Wei-juan2, QU Di1 (1.Key Laboratory of Medical MolecuLar Virology Ministry of Education and Health-Shanghai Medical College, Fudan Unversity,Shanghai 200032, China; 2 ......

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