荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA观察
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乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验诊断主要依据血清学标志(HBV-M)和HBV-DNA的检测。以往运用的普通PCR检测只能定性,其后处理过程易导致假阳性污染,且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物。因此,普通PCR的应用和推广受到一定限制。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(Fluorescence quantitative ,FQ-PCR)克服了常规PCR的不足.[1],直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数,并同时与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行对照,现将结果报道如下。
1材料与方法
1.1标本来源
标本来源于新华医院住院部和门诊部146例患者,清晨空腹抽取静脉血2 mL,分离血清置-20℃备用。
1.2仪器和试剂
Washer 430洗板机由ORGANO公司提供,reader 530 酶标仪ORGANO公司提供,HBV-M ELISA试剂盒由上海实业科华生物技术开发有限公司提供,乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒由深圳匹基生物技术开发有限公司提供,自动荧光定量PCR仪(LightCycler)为瑞士Roche公司产品。
1.3检测方法
HBV-M测定用酶联免疫吸附试验(ELISA法),按说明书操作。HBV-DNA定量分析采用荧光定量聚合酶链反应,按说明书操作。
1.4定量结果统计
用计算对数平均值的方法来计算HBV-DNA平均拷贝数,阴性结果不参加平均值的统计,采用成组设计的两样本均数比较的t检验。
2结果
对146份血清用ELISA方法进行HBV血清标志物检测,按检测结果分成13组,并用荧光定量聚合酶链反应进行相应HBV-DNA含量测定,两种方法所得结果的关系见表1。血清HBeAg阳性组别(1组)的HBV-DNA含量高于HBeAb阳性组别(2组)及HBcAb阳性组别(4组),P
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