用麻疹活疫苗制备抗麻疹病毒单克隆抗体及其应用(1)
文章编号：1004-9231(2008)08-0369-03
摘要：[目的] 制备抗麻疹病毒(MV)的单克隆抗体(单抗，McAb)，并用该单抗研制捕获法ELISA检测MV-IgM的诊断试剂盒。 [方法] 以MV减毒活疫苗免疫Balb/c小鼠，其脾细胞与SP2/0细胞融合，筛选分泌抗MV的杂交瘤细胞株，以获得该单抗，并对用其研制的检测抗MV-IgM试剂盒进行考核。 [结果] 获得的杂交瘤细胞株中，B2能稳定分泌高滴度抗MV单抗。经考核，用该单抗酶结合物研制的检测抗麻疹-IgM试剂盒特异性和稳定性良好，与同类商品试剂盒比较，其检出麻疹病例血清抗MV-IgM的时间较早。 [结论] 应用麻疹减毒活疫苗成功地制备了小鼠杂交瘤细胞，其中B2株能稳定分泌高效的抗MV 单抗，用于研制检测抗MV-IgM捕获法ELISA试剂盒，其敏感性、特异性和稳定性令人满意。
关键词：麻疹病毒；单克隆抗体；抗麻疹病毒-IgM；酶联免疫吸附试验
, 百拇医药
中图分类号：R 511.1 文献标识码：A
Preparation and usage of the monoclonal antibody from living attenuated measles virus vaccine ZHU Li-hua，CHEN Juan-juan，ZHOU Zhi-tong，et al (Shanghai Public Health Centre Affiliated to Fudan University，Shanghai 201508，China)
Abstract：[Objective] To develop the monoclonal antibody (McAb) against measles virus(MV) and use it to prepare capture ELISA anti–MV specific IgM kit. [Methods] Balb/c mice were immunized with MV attenuated vaccines and their spleen cells were fused with SP2/0 cells. From these mice，the McAb against MV was obtained and used to prepare capture ELISA anti MV specific IgM kit. [Results] B2 strain hybridoma cells could secret McAb against MV in high titer specifically. McAb was used to preparate capture ELISA anti MV specific IgM kit. The specificity and stability of this kit were good. Anti MV-IgM in sera in cases with measles could be detected by this kit earlier than that by a same type commercial kit. [Conclusion] The sensitivity，specificity and stability of the capture ELISA anti–MV specific IgM kit prepared using the McAb are satisfactory。
, 百拇医药
Key words：Measles virus；Monoclonal antibody；Anti MV specific IgM；ELISA
麻疹是一种高度传染的呼吸道病毒感染，具有典型的临床症状，包括斑丘疹、发热、咳嗽、鼻炎和结膜炎。最近数十年来，全球普遍使用了麻疹疫苗，麻疹的患病数和死亡数大幅度下降，但此病的流行仍有发生。世界卫生组织 (WHO) 估计，2000年麻疹病例≥ 3000万，造成77.7万例死亡[1]。虽然1999—2003年间麻疹相关的死亡数从87.3万例降至53万例，但麻疹病毒仍是发展中国家儿童的发病和死亡的主要原因之一[2]。麻疹病毒(MV)感染的实验室诊断“金标准”是检测到麻疹特异性IgM [3]，可采用捕获法ELISA或是免疫荧光法检测，在1个月内未接种过麻疹减毒活疫苗而在血清中查到麻疹IgM抗体作为麻疹实验室诊断标准之一 [4]。WHO推荐采集临床可疑麻疹病例血清标本检测IgM 和尿液标本、鼻咽标本检测麻疹病毒基因组[5]，前者用于证实急性麻疹感染的诊断，而后者确定病毒基因型。因此，临床和流行病学迫切需要一种快速、廉价、和准确检测MV-IgM抗体的诊断试剂盒。我们通过应用麻疹减毒活疫苗免疫Balb/c小鼠，制备MV 的McAb，并用其成功地研制了捕获法检测抗MV-IgM的ELISA试剂盒。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 杂交瘤建株 MV减毒活疫苗株(上生®国药准字S10820293，产品批号：2004012403)；羊抗小鼠IgG-HRP(上海生物制品研究所产品)；8周龄雌性Balb/c小鼠购于上海复旦大学实验动物科学部 (SCXK沪2002-0002)；SP 2/0骨髓瘤细胞和其他材料为本室原有。
1.1.2 乙型脑炎病毒(JEV)减毒活疫苗和灭活甲型肝炎病毒细胞培养抗原 JEV减毒活疫苗为成都生物制品所产品(蓉生®国药准字S10900004，批号20041289-1)，FRhK4细胞培养甲肝病毒抗原由本室制备并灭活。
1.1.3 质控血清 抗甲型肝炎病毒-IgM(抗HAV-IgM)、抗乙脑病毒-IgM(抗JEV-IgM)、抗乙型肝炎病毒核心抗原-IgM(抗HBc-IgM)、抗巨细胞病毒-IgM(抗CMV-IgM)、抗EB病毒-IgM(抗EBV-IgM)阳性血清各6份和类风湿因子(RF)阳性血清10份均来自本中心检验科。用德国维润赛润生物有限公司抗MV-IgM试剂盒检测为阳性和阴性各15份标本作为标准阳性和阴性对照品。
, http://www.100md.com
1.1.4 临床血清标本 39例临床疑似麻疹患者的血清56份(7例具有双份或3份血清)系本中心2006年采集。
1.1.5 同类商品试剂盒 同类捕获法检测抗MV-IgM ELISA商品试剂盒为珠海海泰生物制药有限公司产品(批号060501)。
1.2 方法
1.2.1 分泌抗MV杂交瘤细胞株的建立 以MV减毒活疫苗株腹腔免疫Balb/c雌性小鼠，4周后加强免疫，3 d后取脾细胞与SP 2/0细胞融合，方法参照文献[6] 。以ELISA法筛选分泌抗MV的阳性杂交瘤细胞，按有限稀释法连续克隆3次纯化后，注入用降植烷预处理过的Balb/c小鼠腹腔，10 d后抽取腹水鉴定。
1.2.2 抗MV McAb的滴度和特异性鉴定 以ELISA测定腹水中杂交瘤细胞的抗麻疹病毒抗体滴度，并用JEV减毒活疫苗、灭活甲肝细胞培养抗原和SP 2/0细胞培养液(阴性对照)替代麻疹减毒活疫苗鉴定MV McAb的特异性。, 百拇医药(朱黎华 陈娟娟 周志统 蒋伟伦 杨 华)
摘要：[目的] 制备抗麻疹病毒(MV)的单克隆抗体(单抗，McAb)，并用该单抗研制捕获法ELISA检测MV-IgM的诊断试剂盒。 [方法] 以MV减毒活疫苗免疫Balb/c小鼠，其脾细胞与SP2/0细胞融合，筛选分泌抗MV的杂交瘤细胞株，以获得该单抗，并对用其研制的检测抗MV-IgM试剂盒进行考核。 [结果] 获得的杂交瘤细胞株中，B2能稳定分泌高滴度抗MV单抗。经考核，用该单抗酶结合物研制的检测抗麻疹-IgM试剂盒特异性和稳定性良好，与同类商品试剂盒比较，其检出麻疹病例血清抗MV-IgM的时间较早。 [结论] 应用麻疹减毒活疫苗成功地制备了小鼠杂交瘤细胞，其中B2株能稳定分泌高效的抗MV 单抗，用于研制检测抗MV-IgM捕获法ELISA试剂盒，其敏感性、特异性和稳定性令人满意。
关键词：麻疹病毒；单克隆抗体；抗麻疹病毒-IgM；酶联免疫吸附试验
, 百拇医药
中图分类号：R 511.1 文献标识码：A
Preparation and usage of the monoclonal antibody from living attenuated measles virus vaccine ZHU Li-hua，CHEN Juan-juan，ZHOU Zhi-tong，et al (Shanghai Public Health Centre Affiliated to Fudan University，Shanghai 201508，China)
Abstract：[Objective] To develop the monoclonal antibody (McAb) against measles virus(MV) and use it to prepare capture ELISA anti–MV specific IgM kit. [Methods] Balb/c mice were immunized with MV attenuated vaccines and their spleen cells were fused with SP2/0 cells. From these mice，the McAb against MV was obtained and used to prepare capture ELISA anti MV specific IgM kit. [Results] B2 strain hybridoma cells could secret McAb against MV in high titer specifically. McAb was used to preparate capture ELISA anti MV specific IgM kit. The specificity and stability of this kit were good. Anti MV-IgM in sera in cases with measles could be detected by this kit earlier than that by a same type commercial kit. [Conclusion] The sensitivity，specificity and stability of the capture ELISA anti–MV specific IgM kit prepared using the McAb are satisfactory。
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Key words：Measles virus；Monoclonal antibody；Anti MV specific IgM；ELISA
麻疹是一种高度传染的呼吸道病毒感染，具有典型的临床症状，包括斑丘疹、发热、咳嗽、鼻炎和结膜炎。最近数十年来，全球普遍使用了麻疹疫苗，麻疹的患病数和死亡数大幅度下降，但此病的流行仍有发生。世界卫生组织 (WHO) 估计，2000年麻疹病例≥ 3000万，造成77.7万例死亡[1]。虽然1999—2003年间麻疹相关的死亡数从87.3万例降至53万例，但麻疹病毒仍是发展中国家儿童的发病和死亡的主要原因之一[2]。麻疹病毒(MV)感染的实验室诊断“金标准”是检测到麻疹特异性IgM [3]，可采用捕获法ELISA或是免疫荧光法检测，在1个月内未接种过麻疹减毒活疫苗而在血清中查到麻疹IgM抗体作为麻疹实验室诊断标准之一 [4]。WHO推荐采集临床可疑麻疹病例血清标本检测IgM 和尿液标本、鼻咽标本检测麻疹病毒基因组[5]，前者用于证实急性麻疹感染的诊断，而后者确定病毒基因型。因此，临床和流行病学迫切需要一种快速、廉价、和准确检测MV-IgM抗体的诊断试剂盒。我们通过应用麻疹减毒活疫苗免疫Balb/c小鼠，制备MV 的McAb，并用其成功地研制了捕获法检测抗MV-IgM的ELISA试剂盒。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 杂交瘤建株 MV减毒活疫苗株(上生®国药准字S10820293，产品批号：2004012403)；羊抗小鼠IgG-HRP(上海生物制品研究所产品)；8周龄雌性Balb/c小鼠购于上海复旦大学实验动物科学部 (SCXK沪2002-0002)；SP 2/0骨髓瘤细胞和其他材料为本室原有。
1.1.2 乙型脑炎病毒(JEV)减毒活疫苗和灭活甲型肝炎病毒细胞培养抗原 JEV减毒活疫苗为成都生物制品所产品(蓉生®国药准字S10900004，批号20041289-1)，FRhK4细胞培养甲肝病毒抗原由本室制备并灭活。
1.1.3 质控血清 抗甲型肝炎病毒-IgM(抗HAV-IgM)、抗乙脑病毒-IgM(抗JEV-IgM)、抗乙型肝炎病毒核心抗原-IgM(抗HBc-IgM)、抗巨细胞病毒-IgM(抗CMV-IgM)、抗EB病毒-IgM(抗EBV-IgM)阳性血清各6份和类风湿因子(RF)阳性血清10份均来自本中心检验科。用德国维润赛润生物有限公司抗MV-IgM试剂盒检测为阳性和阴性各15份标本作为标准阳性和阴性对照品。
, http://www.100md.com
1.1.4 临床血清标本 39例临床疑似麻疹患者的血清56份(7例具有双份或3份血清)系本中心2006年采集。
1.1.5 同类商品试剂盒 同类捕获法检测抗MV-IgM ELISA商品试剂盒为珠海海泰生物制药有限公司产品(批号060501)。
1.2 方法
1.2.1 分泌抗MV杂交瘤细胞株的建立 以MV减毒活疫苗株腹腔免疫Balb/c雌性小鼠，4周后加强免疫，3 d后取脾细胞与SP 2/0细胞融合，方法参照文献[6] 。以ELISA法筛选分泌抗MV的阳性杂交瘤细胞，按有限稀释法连续克隆3次纯化后，注入用降植烷预处理过的Balb/c小鼠腹腔，10 d后抽取腹水鉴定。
1.2.2 抗MV McAb的滴度和特异性鉴定 以ELISA测定腹水中杂交瘤细胞的抗麻疹病毒抗体滴度，并用JEV减毒活疫苗、灭活甲肝细胞培养抗原和SP 2/0细胞培养液(阴性对照)替代麻疹减毒活疫苗鉴定MV McAb的特异性。, 百拇医药(朱黎华 陈娟娟 周志统 蒋伟伦 杨 华)