CleistanthinA对黑素瘤细胞迁移及β—catenin蛋白的影响(2)
A375人黑素瘤細胞由中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所(中国北京)友情提供。 在整个研究中,将细胞在补充有10%FBS和抗生素(100U / ml青霉素和100μg/ ml链霉素)的RPMI-1640中37℃培养,培养环境为含5%CO2的潮湿空气。
1.1 细胞划痕实验测定。 体外细胞划痕实验测定用于观察CA处理后A375细胞的迁移。 将细胞(1×106个细胞/ ml)接种到6孔板中并孵育24小时。然后用无菌微量移液管尖端刮下细胞单层的中心,以产生恒定宽度的直线间隙。用PBS洗涤孔,并将细胞接种于各种浓度的CA(0,0.003,0.01,0.03,0.1和0.3μM)。 使用倒置光学显微镜(放大倍数,×200)(Leica Microsystems GmbH,Wetzlar,Germany)在0和24小时对划痕闭合进行成像、测量并统计。
1.2 western blot实验测定。将细胞接种到6cm培养皿中,24小时后达到60-80%融合 ......
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