红景天提取物对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响
【摘 要】目的：探讨红景天提取物对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的积极影响。方法：分别体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞株分别以5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml的红景天提取物处理0-96h，采用Cell Counging Kit-8法检测细胞相对存活率，于显微镜观测细胞形态变化，检测细胞凋亡率和增值情况。结果：红景天提取物浓度越高，肺癌细胞活力抑制作用越明显，抑制率分别为22.05%、25.65%、39.50%，显著高于PBS(P<0.05)，细胞凋亡率分别为(17.33±0.59)%，(22.30±0.25)%(33.25±0.45)%，与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论：红景提取物可以明显抑制细胞的增值和凋亡，对肺癌有很好的抑制作用。
【关键词】Lewis肺癌；细胞增殖；凋亡；红景天；成分提取
【中图分类号】R575.6 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019(2018)22-00-01
肺癌是常见的呼吸系统恶性肿瘤，疾病的发病率近年来也越来越高，临床上治疗该疾病的药物耐药性越来越低，疾病治疗出现很大的挑战和困难，必须尽快寻找新的药物，提高肺癌疾病患者的临床治疗效果，改善患者的预后[1]。根据体外肿瘤研究指出，红景天提取物能有效抑制肿瘤细胞的扩散和增值，促进肿瘤细胞的凋亡。但是，关于红景天的真正作用和治疗机制，目前研究并不多。本文以小鼠Lewis肺癌细胞LIC作为对象，观察红景天对肺癌细胞肿瘤的积极影响。总结具体报告如下：
1 一般材料与仪器
1.1 材料 小鼠Lewis肺癌细胞株LIC，购自ATCC。
1.2 试剂和仪器 使用RPMI-1640培养液、胎牛血清、Anmxin-V-FITC凋亡检测的试剂盒，Cell Counting Kit-8，恒温培养箱，SUNRISE酶标仪和FACSCalibur流失细胞仪。
2 方法
2.1 红景天材料提取
取红景天置于烘烤箱中粉碎，按进行超声提取液冷却，回收乙醇，加30倍量水洗脱，使用30%的乙醇洗脱，真空包装压缩，得到提取物，配置成0.5、1.0、2.0mg/ml不同浓度的样本进行实验。将LIC细胞用10%的胎牛血清、RPMI-1640培养液中，放置于温度为37℃5%的二氧化碳饱和湿度的培养皿中，实验时，取处于对数生长期的细胞。
2.3 增值抑制实验
从样本中选取对数生长期的細胞株LIC细胞，经过胰蛋白酶消化，以体积4*103个大小接种于96号孔板中，母孔100μl，培养24h后，放弃原本的培养基，实验组加入10%的胎牛血清的RPMI1640维持液稀释，得到不同浓度的红景天溶液；对照组加1640细胞，空白对照组不加细胞仅用1640维持液进行稀释，每组都有3个复孔。培养24h后，分别加入100μlCCK-8液体中，置于5%的CO2条件下，在酶标仪波长下测定吸光度、抑制率和增值率。
2.4 流式细胞术测凋亡率
采用AnnexinV/PI双染色检测LIC细胞凋亡率，收集处理后，冷却脱洗2次，然后将细胞悬置在冲液上面，细胞计数后调整细胞浓度为1*106个/ml，吹打混合均匀后取100μl细胞悬液加入流失试管中，分别加入5μlPI-PE及5μlAnnexinV-FITC，混合后置于阴凉避光处5min，加入400IPRS，完成检测。
2.5 接种与治疗 大量培养肺癌细胞株LIC，取对数生长期的肺癌细胞，每只裸鼠随机分为4组，其中3组分别注射低剂量、中等剂量和高剂量，1组仅接受PRS，于每天上午同一时间，腹腔给药。
2.6 统计学方法
研究中涉及到的统计数据均纳入SPSS 20.0进行处理，百分数占比为人数/总人数，比较使用卡方检验，平均年龄、病程数据比较采用平均数±标准差表示行t检验，当P<0.05为比较差异具有统计学意义。
3 结果
3.1 增值抑制率
剂量低、中、高三组不同浓度红景天提取物作用于LIC肿瘤细胞，CCK-8细胞检测结果证实，肿瘤细胞明显时间-效应依赖关系在24h内达到最强；低、中、高浓度红景天组24h的抑制率分别为22.05%、25.65%、39.50%，明显高于PBS的12.80%，差异显著(P<0.05)，且随着浓度升高，增值抑制率也出现升高。
3.2 细胞凋亡率
采用AnnexinV-FITC/PI进行双染法检测细胞凋亡，流失细胞仪检测分析，计算凋亡细胞百分率，低中高浓度的红景天提取物作用在24h后分别达到(17.33±0.59)%，(22.30±0.25)%(33.25±0.45)%，与PBS组相比，差异显著(P<0.05)。
4 讨论
进展期肺癌的患者对于常规的化疗药物的耐受性很低，患者癌细胞已经出现了转移和扩散。肺癌造成的死亡率近年来居高不下，成为严重威胁我国人们健康和生命安全的恶性肿瘤之一[2]，很多患者一旦确诊就处于疾病晚期，手术治疗已经无法取得效果。临床会首选化疗进行治疗，但是单纯药物进行化疗治疗，并不能取得很理想的效果。我国传统的中草药在治疗肺癌疾病方面有着重要的积极作用[3]，且物资丰富，对机体毒副作用也非常小，患者的耐药性也比较高，中草药治疗肺癌疾病已经逐渐引起人们的重视。红景天被称为“高原人参”，具有增强免疫力的作用，能抗疲劳、防衰老，抗病毒和防辐射，减轻高原反应等。通过本文研究发现，将红景天提取物用于肺癌细胞，能使肺癌细胞间距变大，包浆中出现颗粒沉积，细胞增殖抑制实验结果显示，提取物进入后能抑制细胞增殖，并且浓度越大抑制增殖的效果就越好；红景天对肺癌细胞的生长抑制方式也有很明显的诱导凋亡作用，结果表示，能直接抑制生长。
综上所述，红景天抗肿瘤作用机制非常明显，能抑制肺癌细胞的增值和凋亡，抑制细胞的增值率，随着研究的不断深入，能用于临床治疗肿瘤疾病中，为广大癌症患者带来很大的福音。
参考文献
周立江，潘玉真，殷东风. 肺积宁方影响Lewis肺癌细胞增殖和自噬的作用机制研究[J]. 中华中医药学刊，2016(7)：1739-1742.
王英存，汤晓琳，刘丹，等. 红景天提取物应用于化妆品的生化和细胞学功效评价[J]. 日用化学品科学，2018(3).
韩何丹，王海，李艾琳，等. 红景天提取物对顺铂致肾细胞毒性的保护作用[J]. 癌变·畸变·突变，2018，30(3)：204-208., 百拇医药(冯秋红)
【关键词】Lewis肺癌；细胞增殖；凋亡；红景天；成分提取
【中图分类号】R575.6 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019(2018)22-00-01
肺癌是常见的呼吸系统恶性肿瘤，疾病的发病率近年来也越来越高，临床上治疗该疾病的药物耐药性越来越低，疾病治疗出现很大的挑战和困难，必须尽快寻找新的药物，提高肺癌疾病患者的临床治疗效果，改善患者的预后[1]。根据体外肿瘤研究指出，红景天提取物能有效抑制肿瘤细胞的扩散和增值，促进肿瘤细胞的凋亡。但是，关于红景天的真正作用和治疗机制，目前研究并不多。本文以小鼠Lewis肺癌细胞LIC作为对象，观察红景天对肺癌细胞肿瘤的积极影响。总结具体报告如下：
1 一般材料与仪器
1.1 材料 小鼠Lewis肺癌细胞株LIC，购自ATCC。
1.2 试剂和仪器 使用RPMI-1640培养液、胎牛血清、Anmxin-V-FITC凋亡检测的试剂盒，Cell Counting Kit-8，恒温培养箱，SUNRISE酶标仪和FACSCalibur流失细胞仪。
2 方法
2.1 红景天材料提取
取红景天置于烘烤箱中粉碎，按进行超声提取液冷却，回收乙醇，加30倍量水洗脱，使用30%的乙醇洗脱，真空包装压缩，得到提取物，配置成0.5、1.0、2.0mg/ml不同浓度的样本进行实验。将LIC细胞用10%的胎牛血清、RPMI-1640培养液中，放置于温度为37℃5%的二氧化碳饱和湿度的培养皿中，实验时，取处于对数生长期的细胞。
2.3 增值抑制实验
从样本中选取对数生长期的細胞株LIC细胞，经过胰蛋白酶消化，以体积4*103个大小接种于96号孔板中，母孔100μl，培养24h后，放弃原本的培养基，实验组加入10%的胎牛血清的RPMI1640维持液稀释，得到不同浓度的红景天溶液；对照组加1640细胞，空白对照组不加细胞仅用1640维持液进行稀释，每组都有3个复孔。培养24h后，分别加入100μlCCK-8液体中，置于5%的CO2条件下，在酶标仪波长下测定吸光度、抑制率和增值率。
2.4 流式细胞术测凋亡率
采用AnnexinV/PI双染色检测LIC细胞凋亡率，收集处理后，冷却脱洗2次，然后将细胞悬置在冲液上面，细胞计数后调整细胞浓度为1*106个/ml，吹打混合均匀后取100μl细胞悬液加入流失试管中，分别加入5μlPI-PE及5μlAnnexinV-FITC，混合后置于阴凉避光处5min，加入400IPRS，完成检测。
2.5 接种与治疗 大量培养肺癌细胞株LIC，取对数生长期的肺癌细胞，每只裸鼠随机分为4组，其中3组分别注射低剂量、中等剂量和高剂量，1组仅接受PRS，于每天上午同一时间，腹腔给药。
2.6 统计学方法
研究中涉及到的统计数据均纳入SPSS 20.0进行处理，百分数占比为人数/总人数，比较使用卡方检验，平均年龄、病程数据比较采用平均数±标准差表示行t检验，当P<0.05为比较差异具有统计学意义。
3 结果
3.1 增值抑制率
剂量低、中、高三组不同浓度红景天提取物作用于LIC肿瘤细胞，CCK-8细胞检测结果证实，肿瘤细胞明显时间-效应依赖关系在24h内达到最强；低、中、高浓度红景天组24h的抑制率分别为22.05%、25.65%、39.50%，明显高于PBS的12.80%，差异显著(P<0.05)，且随着浓度升高，增值抑制率也出现升高。
3.2 细胞凋亡率
采用AnnexinV-FITC/PI进行双染法检测细胞凋亡，流失细胞仪检测分析，计算凋亡细胞百分率，低中高浓度的红景天提取物作用在24h后分别达到(17.33±0.59)%，(22.30±0.25)%(33.25±0.45)%，与PBS组相比，差异显著(P<0.05)。
4 讨论
进展期肺癌的患者对于常规的化疗药物的耐受性很低，患者癌细胞已经出现了转移和扩散。肺癌造成的死亡率近年来居高不下，成为严重威胁我国人们健康和生命安全的恶性肿瘤之一[2]，很多患者一旦确诊就处于疾病晚期，手术治疗已经无法取得效果。临床会首选化疗进行治疗，但是单纯药物进行化疗治疗，并不能取得很理想的效果。我国传统的中草药在治疗肺癌疾病方面有着重要的积极作用[3]，且物资丰富，对机体毒副作用也非常小，患者的耐药性也比较高，中草药治疗肺癌疾病已经逐渐引起人们的重视。红景天被称为“高原人参”，具有增强免疫力的作用，能抗疲劳、防衰老，抗病毒和防辐射，减轻高原反应等。通过本文研究发现，将红景天提取物用于肺癌细胞，能使肺癌细胞间距变大，包浆中出现颗粒沉积，细胞增殖抑制实验结果显示，提取物进入后能抑制细胞增殖，并且浓度越大抑制增殖的效果就越好；红景天对肺癌细胞的生长抑制方式也有很明显的诱导凋亡作用，结果表示，能直接抑制生长。
综上所述，红景天抗肿瘤作用机制非常明显，能抑制肺癌细胞的增值和凋亡，抑制细胞的增值率，随着研究的不断深入，能用于临床治疗肿瘤疾病中，为广大癌症患者带来很大的福音。
参考文献
周立江，潘玉真，殷东风. 肺积宁方影响Lewis肺癌细胞增殖和自噬的作用机制研究[J]. 中华中医药学刊，2016(7)：1739-1742.
王英存，汤晓琳，刘丹，等. 红景天提取物应用于化妆品的生化和细胞学功效评价[J]. 日用化学品科学，2018(3).
韩何丹，王海，李艾琳，等. 红景天提取物对顺铂致肾细胞毒性的保护作用[J]. 癌变·畸变·突变，2018，30(3)：204-208., 百拇医药(冯秋红)