HPLC法测定绿咖啡豆提取物中有效成分的含量(1)

http://www.100md.com 2018年12月1日 《健康大视野》 2018年第23期

     【摘 要】目的：建立测定绿咖啡豆提取物中绿原酸的HPLC方法，测定和比较不同绿咖啡豆提取物绿原酸的含量。方法：采用十八烷基键合硅胶填充柱(C18(2)，100A，4.6×250mm，5?m)；以乙腈-水-甲酸(250：750：1，v/v/v)为流动相A，以乙腈-水-甲酸(100：900：1，v/v/v)为流动相B，梯度洗脱为0～20min，0～100%A，100～0%B；20–30min，100%A，0%B；30～32min，100～0%A，0～100%B；32～40min，0%A，100%B，体积流量为1.5mL/min；柱温25℃；检测波长为330nm；进样量10μL。结果：绿原酸在0.02～0.20μg呈线性良好关系；其平均回收率(n=18)为99.73%。结论：该法简便，重复性好，可用于绿咖啡豆提取物中绿原酸成分的含量测定。

    【关键词】绿咖啡豆提取物；绿原酸

    Abstract：Objective To establish an HPLC method for determination chlorogenic acid from Green coffee been extract，determinate and compare the contents of chlorogenic acid from different Green coffee been extract. Methods： The HPLC system consisted of a C18 (4.6×250 mm，5 ?m)，the mobile phase A was acetonitrile-water-formic acid(250：750：1，v/v/v)，the mobile phase B was acetonitrile-water-formic acid(100：900：1，v/v/v).The gradient elution condinations： 0～20 min，0～100%A，100～0%B，20 – 30 min，100%A，0%B，30～32 min，100～0%A ，0～100%B，32～40 min，0%A，100%B，The flow rate was 1.5 mL/min and the column temperature was 25 ，The detection wavelength was 330 nm and the injection volume was 10 μl. Results： The calibration curves of chlorogenic acid had good linear relationship in the ranges of 0.02～0.20 μg，And the average recoveries (n=18) of chlorogenic acid was 99.73%，respectively. Conclusion： This method can be applied to determinating the components from Green coffee been extract.
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    Key words： Green coffee been extract；chlorogenic acid

    【中圖分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019(2018)23-0-01

    绿咖啡豆提取物(Green coffee been extract)是以咖啡树Coffea arabica L.或罗布斯塔Coffee robusta L.成熟的种子去壳后经水或一定比例的乙醇水溶液提取分离制成的植物提取物，其中有效成分主要为绿原酸，具有降压、抗肿瘤、补肾、抗氧化等作用，也可用作保健食品中，使保健食品香甜可口味道好。目前天然植提行业中已了解的绿原酸成分有3-咖啡酰奎尼酸(3-CQA)， 5-咖啡酰奎尼酸(5-CQA)， 4-咖啡酰奎尼酸(4-CQA)， 5-阿魏酰奎尼酸， (5-FQA)， 3，4-二咖啡酰奎尼酸(3，4-diCQA)， 3，5-二咖啡酰奎尼酸 (3，5-diCQA)， 和4，5-二咖啡酰奎尼酸 (4，5-diCQA)。虽已有不少绿原酸成分的研究，但对绿原酸含量的测定却未见文献报道。故本研究建立了HPLC法测定现在市场中主要的绿咖啡豆提取物中绿原酸的含量的方法，为绿咖啡豆提取物的质量评价提供科学依据。
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    1 仪器与试药

    1.1 仪器 岛津LC-15C高效液相色谱仪；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；PHS-3C型精密pH计(上海精密科学仪器有限公司)；HWS24电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)；AE240电子天平(梅特勒-托利多)。UV-1800紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)。

    1.2 试药 样品由浙江天草生物科技有限公司生产提供的样品(批号：20161001、20161002、20161003)以及多种市售产品的样品组成。具体样品信息见表1。对照品由浙江天草生物科技有限公司生产提供(批号：20160801) 含量：98.5%。水为娃哈哈纯净水(娃哈哈集团有限公司)，甲酸(色谱级)，乙腈(色谱级)。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件 采用十八烷基键合硅胶填充柱(C18(2)，100A，4.6250mm，5?m)；以乙腈-水-甲酸(250：750：1，v/v/v)为流动相A，以乙腈-水-甲酸(100：900：1，v/v/v)为流动相B，按表2中的要求进行梯度洗脱；柱温25℃；检测波长为330nm；流速为1.5mL/min；进样量10μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于10000。, http://www.100md.com(邢新锋 叶强)

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